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寨卡病毒PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

閱讀:879      發(fā)布時間:2020-11-24
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寨卡病毒PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標本:血清,、血漿(EDTA ,、檸檬酸鹽、肝素抗凝),、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時,;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,,避免反復凍融。
2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,,配成 120 0ng/ml 的溶液 ,。 設(shè)標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul ,。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 ,。如此反復作對倍稀釋,,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照,。
3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水),。
4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序:
1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,,向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul ,。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘,。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液100ul ,。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘,。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ,,置 37   ℃ 暗處反應15 分鐘,。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值,。
性能:
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 U/mL,。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應,。
4. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5. 貯藏:2-8℃,,避光防潮保存。
6. 有效期:6個月

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