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細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:1472      發(fā)布時(shí)間:2020-11-10
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細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:

①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度,。

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