在競(jìng)爭(zhēng)法維生素B6檢測(cè)試劑盒中,,陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔,。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間,,此時(shí)反應(yīng)為敏感,。
競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果,因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異,,一般均用比色計(jì)測(cè)定,,讀出S、P和N的吸光值,。計(jì)算方法主要也有兩種,,即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。
a. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,,按下式計(jì)算:
抑制率(%)= ELISA試劑盒(陰性對(duì)照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對(duì)照A值,,一般規(guī)定抑制率≥50%為陽(yáng)性,<50%為陰性,。
b. 陽(yáng)性判定值法
與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同,,ELISA試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值,現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例,。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿,,陽(yáng)性對(duì)照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,,先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均值(NCX)和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),,兩個(gè)平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)小于2.000,,而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,,如其中之一超出此范圍,則棄去,,而以另2個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算×NCX,;如有2個(gè)陰性對(duì)照A超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效,。陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,,標(biāo)本A值≤陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陽(yáng)性,A>陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陰性,。
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