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侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒組成及試劑配

閱讀:1012      發(fā)布時(shí)間:2020-5-19
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侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒組成及試劑配制:

1,、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制,。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),,分別配制成200 U/L,,100 U/L,50 U/L,,25 U/L,,12.5 U/L,6.25 U/L,,3.12 U/L,,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,,混勻即可,,其余濃度以此類推,。

3、 樣品稀釋液:1×20ml,。

4,、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5,、 檢測稀釋液B:1×10ml,。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對(duì)原則,;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;

④靶基因的特異性與保守性。

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