腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC)核酸檢測(cè)試劑盒特點(diǎn):
1,、靈敏度高,,抗污染能力強(qiáng),定量準(zhǔn)確,,重復(fù)性好,;
2、樣本處理與PCR擴(kuò)增在同一個(gè)PCR反應(yīng)管中即可完成,;
3,、無(wú)需加熱,無(wú)需離心,,操作極其簡(jiǎn)單,,耗材消耗極少,只需微量標(biāo)本即可實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè),;
4,、設(shè)置了內(nèi)對(duì)照(內(nèi)標(biāo)),,設(shè)置了UNG酶+dUTP防污染體系,避免假陰性,、假陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)生,;
5、設(shè)置了內(nèi)參比熒光ROX,,校正加樣誤差和管間差異,,使定量更準(zhǔn)確,。
操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
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