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大鼠纖連蛋白(FN)免疫組化檢測(cè)試劑盒操作步驟

閱讀:1940      發(fā)布時(shí)間:2020-3-9
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大鼠纖連蛋白(FN)免疫組化檢測(cè)試劑盒操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔,、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,,然后再加待測(cè)樣品 10µl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,,如此 重復(fù) 5 次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值),。 

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