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細胞培養(yǎng)的環(huán)境因素

1．無菌環(huán)境

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件,。細胞在活體內(nèi),，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細胞在體外培養(yǎng)的過程中,，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力,。為保證細胞能在體外環(huán)境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域,、良好的個人衛(wèi)生,、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。

常見的微生物污染有支原體,、細菌,、真菌。支原體無致死毒性,，可與細胞長期共存,，對細胞有潛在影響，但體積小,，不易鑒別,，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測。細菌增殖快,，在短時間內(nèi)即可大量擴增,，并產(chǎn)生毒素殺死細胞,。真菌的種類繁多，肉眼可見,，漂浮于培養(yǎng)液面上,，可呈絲狀、管狀或樹枝狀等,。

2.合適的溫度

一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃,，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞的生長。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力,，在低溫下,，細胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃,，雖然細胞代謝受到影響,，但無損傷作用,；25～35℃時，細胞以緩慢的速度生長；但若被置于40℃數(shù)小時,，則不僅不利于細胞生存,、生長，甚至可導致其死亡,。

3．氣體環(huán)境與pH

細胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件,。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán),，為細胞生存、代謝與合成提供能量,；二氧化碳既是細胞的代謝產(chǎn)物,，是細胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān),。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4,。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜,。 

4.適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發(fā)生褶皺,、腫脹、破裂,。因此,，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力,，實際應用中,，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞,。