傘枝梨頭霉PCR試劑盒是指將RNA 的反轉(zhuǎn)錄和cDNA 的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增相結(jié)合的技術(shù),。利用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,,再以cDNA 為模板,擴(kuò)增合成目的片段,。PCR試劑盒的常見應(yīng)用包括基因檢測,、轉(zhuǎn)錄物變異檢測,以及克隆和測序用cDNA模板制備,。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒的低溫存法:
①簡單保存法,,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮,、大米,、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達(dá)3~4個月,;
②液氮超低溫保存法,,將生長穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),,然后控制冷卻速度,,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存,。大多數(shù)微生物如病毒,、噬菌體、多種細(xì)菌,、放線菌,、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,,都可用此法長期保存,。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒的脫水存法:
①沙土保存法,能產(chǎn)孢子的細(xì)菌,、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,,經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長良好的孢子,,用無菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,,經(jīng)真空抽干,,外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,保存期可達(dá)5~7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合,,放在安瓿管內(nèi)于-20~-30℃的乙醇浴中速凍,。然后,在低溫下用真空泵抽干,,并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍,,熔封安瓿管,于低溫下保存,。保存期可達(dá)5~10年之久,。
③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油,,高出斜面1cm,,于4℃冰箱或低溫干燥處保存,此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,,保存期為一年以上,。
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