亮發(fā)光桿菌實(shí)驗(yàn)試劑
采用T7• Tag Affinity Purification Kit
T7•Tag抗體瓊脂,。B/W緩沖液：4.29mM Na2HPO4,，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl,， 0.137mM NaCl,，1%吐溫-20，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸,，pH2.2. 中和緩沖液：2M Tris,，pH10.4。 PEG 20000,。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.100ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,，離心5000g×5min，棄上清,，收獲菌體,，用10ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理,，直至樣品不再粘稠,，4℃離心 14000g×30min，取上清液,，0.45μm膜抽濾后作為樣品液,。
3. 將結(jié)合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫,，裝入層析柱中,。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過(guò)柱。
5. 10ml B/W緩沖液過(guò)柱,，洗去未結(jié)合蛋白,。
6. 用5ml洗脫緩沖液過(guò)柱，每次1ml,，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集,，混勻后置于冰上，直接SDS-PAGE分析,。
7. 將洗脫下來(lái)的蛋白放入透析袋中,，雙蒸水透析24hr，中間換液數(shù)次,。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白,。
亮發(fā)光桿菌注意事項(xiàng)
蛋白在過(guò)層析柱前，要0.45μm膜抽濾,，否則幾次純化后,，柱子中會(huì)有不溶物。
含量測(cè)定 100mg 100619-200501 那格列奈
含量測(cè)定 50mg 100622-200401 鹽酸吉西他濱
含量測(cè)定 100mg 100625-200301 多索茶堿
HPLC法含量測(cè)定 100mg 100626- 200702 烏拉地爾
HPLC法含量測(cè)定 100mg 100627-200401 比卡魯胺
HPLC法含量測(cè)定 100mg 100628-200301 泛昔洛韋
含量測(cè)定 50mg 100629-200301 替米沙坦
亮發(fā)光桿菌
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