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青海發(fā)光桿菌溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和,。這就是吸光度的加和性,。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,，只需測定該提取液在三個(gè)特定波長下的吸光度A,，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度,。在測定葉綠素a,、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的zui大吸收峰,。

二,、材料、儀器設(shè)備及試劑

（一）材料：新鮮（或烘干）的植物葉片,。

（二）儀器設(shè)備：1. 分光光度計(jì),；2. 電子頂載天平（感量0.01g）；3. 研缽,；4. 棕色容量瓶,；5. 小漏斗；6. 定量濾紙,；7. 吸水紙,；8. 擦境紙；9. 滴管,。

（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）,；石英砂；碳酸鈣粉,。

三,、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或干材料，擦凈組織表面污物,，剪碎（去掉中脈）,，混勻,。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份,，分別放入研缽中,，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇,，研成均漿,，再加乙醇10ml，繼續(xù)研磨至組織變白,。靜置3～5min,。3. 取濾紙1張，置漏斗中,，用乙醇濕潤,，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml棕色容量瓶中,，用少量乙醇沖洗研缽,、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，zui后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?. 用滴管吸取乙醇,，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中,。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。zui后用乙醇定容至25ml,，搖勻,。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白,，在波長665nm,、649nm下測定吸光度。

四,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.9665－6.88A649,；Cb=24.96A649－7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca,、Cb：mg/L）,，二者之和為總?cè)~綠素的濃度。zui后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：

     青海發(fā)光桿菌的含量（mg/g）= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）,。
5-巰基-1-甲基四氮唑 98％    13183-79-4    CAS號(hào)：    5-Mercapto-1-methyltetrazole    英文名稱：
5-噻唑甲醛    1003-32-3    CAS號(hào)：    Thiazole-5-carboxaldehyde    英文名稱：
5-叔丁基-1,3-苯二羧酸    2359/9/3    CAS號(hào)：    5-TERT-BUTYLISOPHTHALIC ACID    英文名稱：
5-叔丁基-2-羥基苯甲醛    2725-53-3    CAS號(hào)：    5-TERT-BUTYL-2-HYDROXY-BENZALDEHYDE    英文名稱：
5-硝基尿嘧啶;5-硝基;5-硝基-2,6-二羥基嘧啶;2,4-二羥基-5-硝基嘧啶    611-08-5    CAS號(hào)：    5-Nitrouracil;2,4-Dihydroxy-5-nitropyriMidine    英文名稱：
青海發(fā)光桿菌