青海發(fā)光桿菌成活率,,判斷之形態(tài)學觀察法:
1,、細胞內出現(xiàn)顆粒或空泡,。
2,、細胞內如果出現(xiàn)顆粒物質,表明細胞處于非健康狀態(tài),。
3,、同樣,細胞內出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài),。
細胞喪失雙折射性:
如果發(fā)生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)),,則提示該細胞已經死亡,即zui終干枯死亡,。
如果發(fā)生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,,如胞內出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細胞受損,,甚至死亡,。
怎樣去除死細胞?單層培養(yǎng)的細胞死亡后,,一般會漂浮起來,,因此不需要特殊處理。
而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞,。
細胞成活率檢測實驗
即刻檢測實驗——
染料柜染實驗:原理——萘黑,、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻,,在低倍顯微鏡下檢查,。材料包括無菌材料,即細胞;生長液,;0.25%胰酶,;PBSA.非滅菌材料即:血細胞計數板;生存力染料,;巴斯德吸管,;顯微鏡;手執(zhí)計數器,。
操作步驟:
1,、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細胞懸液
2,、取一塊干凈的血細胞計數板,,將蓋玻片固定在適當位置上,。
3、將一<滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻/li>
4,、加至血細胞計數板的計數室中,。
5、靜置1~2min(但不要放置很久,,否則活細胞會受到損傷而吸收染料),。
6、將計數板置于顯微鏡下,,用10倍物境找到計數網格,。
7、青海發(fā)光桿菌計數細胞總及著色細胞的數目,。
8,、清洗血細胞計數板,放入盒內,。
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