1．費氏弧菌發(fā)光桿菌斜面低溫保藏法
將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后,，棉塞部分用油紙包扎好,，移至2—8℃的冰箱中保藏。
保藏時間依微生物的種類而有不同,，霉菌,、放線菌及有芽孢的細菌保存2—4個月，移種一次,。酵母菌兩個月,，細菌每月移種一次。
此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法,，優(yōu)點是操作簡單,，使用方便，不需特殊設備,，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡,、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理,、化學特性不是嚴格恒定的,，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀,；污染雜菌的機會亦較多,。
2．液體石蠟保藏法
（1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶內，塞上棉塞,，并用牛皮紙包扎,，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘,，然后放在40℃溫箱中,，使水汽蒸發(fā)掉，備用,。
（2）將需要保藏的菌種,，在zui適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子,。
（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟,，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準,，使菌種與空氣隔絕,。
（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）,。
此法實用而效果好,。霉菌、放線菌,、芽孢細菌可保藏2年以上不死,，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右,，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌,，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久,。此法的優(yōu)點是制作簡單,，不需特殊設備，且不需經常移種,。缺點是保存時必須直立放置,，所占位置較大，同時也不便攜帶,。從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后,，接種環(huán)在火焰上燒灼時,，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意,。
3．濾紙保藏法
（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條,，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張,，塞以棉塞,，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘,。
（2）將需要保存的菌種,，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長,。
（3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內,，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液,。
（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內,，使其吸飽,，再放回至安瓿管中,，塞上棉塞。
（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中,，用真空泵抽氣至干,。
（6）將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封,，保存于低溫下,。
（7）需要使用菌種，復活培養(yǎng)時,，可將安瓿管口在火焰上燒熱,，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂,，再用鑷子敲掉口端的玻璃,，待安瓿管開啟后，取出濾紙,，放入液體培養(yǎng)基內,，置溫箱中培養(yǎng)。
細菌,、酵母菌,、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右,，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久,。此法較液氮,、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設備,。
4．沙土保藏法
（1）取河沙加入10％稀鹽酸,，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機質,。
（2）倒去酸水,，用自來水沖洗至中性。
（3）烘干,，用40目篩子過篩,，以去掉粗顆粒，備用,。
（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土,，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性,。
（5）烘干,，碾碎，通過100目篩子過篩,，以去除粗顆粒,。
（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例,，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻,，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右,，塞上棉塞,，進行滅菌，烘干,。
（7）抽樣進行無菌檢查,，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中,，37℃培養(yǎng)48小時,，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌,，再作無菌試驗,，直至證明無菌，方可備用,。
（8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長豐滿的,，營養(yǎng)細胞用此法效果不好）優(yōu)良菌種，以無菌水洗下,，制成孢子懸液,。
（9）于每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液,，以接種針拌勻。
（10）放入真空干燥器內,，用真空泵抽干水分,，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干,。
（11）每10支抽取一支,，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培養(yǎng)基上,，進行培養(yǎng),，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長,，則說明制作的沙土管有問題,，尚須進一步抽樣檢查。
（12）若經檢查沒有問題,，用火焰熔封管口,，放冰箱或室內干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況,。
（13）需要使用菌種,，復活培養(yǎng)時，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內,，置溫箱中培養(yǎng),。
此法多用于能產生孢子的微生物如霉菌,、放線菌,，因此在抗生素工業(yè)中應用zui廣，效果亦好,，可保存2年左右,，但應用于營養(yǎng)細胞效果不佳。
5．液氮冷凍保藏法
（1）準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,，因此，需要采用硼硅酸鹽玻璃的安瓿管,，安瓿管的大小通常使用75×10mm的,，或能容1．2mm液體的。
（2）加保護劑與滅菌保存細菌,、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時,，則將空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2,，121．3℃滅菌15分鐘：若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10％的甘油蒸餾水溶液或10％二甲亞砜蒸餾水溶液,，加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限,，而后再用1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌15分鐘,。
（3）接入菌種將菌種用10％的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,，裝入已滅菌的安瓿管；霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器,，從平板內切取菌落圓塊,，放入含有保護劑的安瓿管內，然后用火焰熔封,。浸入水中檢查有無漏洞,。
（4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍,，則在細胞內會形成冰的結晶,，因而降低存活率。
（5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內,，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內,。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態(tài)氮內為-196℃,。
（6）恢復培養(yǎng)保藏的菌種需要用時,，將安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍,，直到全部融化為止,。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng),。
此法除適宜于一般微生物的保藏外,，對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體,、氫細菌,、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏,，而且性狀不變異,。缺點是需要特殊設備。
6．冷凍干燥保藏法
（1）準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃,，形狀可用長頸球形底的,，亦稱淚滴型安瓿管，大小要求外徑6—7．5mm,，長105mm,，球部直徑9—11mm，壁厚0．6—1．2mm,。也可用沒有球部的管狀安瓿管,。塞好棉塞,，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘,，備用,。
（2）準備菌種，用冷凍干燥法保藏的菌種,，其保藏期可達數(shù)年至十數(shù)年,，為了在許多年后不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度,，即不能有雜菌污染,，然后在zui適培養(yǎng)基中用zui適溫度培養(yǎng)，使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物,。細菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期,，若用對數(shù)生長期的菌種進行保藏，其存活率反而降低,。一般,，細菌要求24—48小時的培養(yǎng)物；酵母需培養(yǎng)3天,；形成孢子的微生物則宜保存孢子,；放線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7—10天。
（3）制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例,，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0．2ml,。
（4）冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,，價值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置,，可達到同樣的目的,。
將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,，無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰（固體CO2>）酒精液或干冰丙酮液,，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,，只需冷凍4—5分鐘,，即可使懸液結冰。
（5）真空干燥為在真空干燥時使樣品保持凍結狀態(tài),，需準備冷凍槽,，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻,，可冷至-15℃,。
抽氣一般若在30分鐘內能達到93．3Pa（0．7mmHg）真空度時,，則干燥物不致熔化，以后再繼續(xù)抽氣,，幾小時內,，肉眼可觀察到被干燥物已趨干燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg）,，保持壓力6—8小時即可,。
（6）費氏弧菌發(fā)光桿菌封口抽真空干燥后，取出安瓿管,，接在封口用的玻璃管上,，可用L形五通管繼續(xù)抽氣，約10分鐘即可達到26．7Pa（0．2mmHg）,。于真空狀態(tài)下,，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以后,，保存于冰箱或室溫暗處,。
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