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亮發(fā)光桿菌低溫冷凍保藏技術(shù)

閱讀:1111      發(fā)布時(shí)間:2017-9-26
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1、 亮發(fā)光桿菌安瓿管或凍存管的準(zhǔn)備
用圓底硼硅玻璃制品的安瓿管,,或螺旋口的塑料凍存管,。注意玻璃管不能有裂紋。將凍存管或安瓿管清洗干凈,, 121℃下高壓滅菌15-20分鐘,,備用。
2,、  保護(hù)劑的準(zhǔn)備
保護(hù)劑種類(lèi)要根據(jù)微生物類(lèi)別選擇,。配制保護(hù)劑時(shí),應(yīng)注意其濃度,,一般采用10-20%甘油,。
3、  微生物保藏物的準(zhǔn)備
微生物不同的生理狀態(tài)對(duì)存活率有影響,,一般使用靜止期或成熟期培養(yǎng)物,。
分裝時(shí)注意應(yīng)在無(wú)菌條件下操作。
菌種的準(zhǔn)備可采用下列幾種方法:
刮取培養(yǎng)物斜面上的孢子或菌體,,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi),;
接種液體培養(yǎng)基,振蕩培養(yǎng)后取菌懸液與保護(hù)劑混合分裝于凍存管內(nèi),;
將培養(yǎng)物在平皿培養(yǎng),,形成菌落后,用無(wú)菌打孔器從平板上切取一些大小均勻的小塊(直徑約5-10毫米),,真菌取菌落邊緣的菌塊,,與保護(hù)劑混勻后加入凍存管內(nèi);
在小安瓿管中裝1.2-2毫升的瓊脂培養(yǎng)基,,接種菌種,,培養(yǎng)2-10天后,加入保護(hù)劑,,待保藏,。
4,、  預(yù)凍
預(yù)凍時(shí)一般冷凍速度控制在以每分鐘下降1℃為好、使樣品凍結(jié)到-35℃,。
目前常用的有三種控溫方法:
——  程序控溫降溫法,,應(yīng)用電子計(jì)算機(jī)程序控制降溫裝置,可以穩(wěn)定連續(xù)降溫,,能很好地控制降溫速率,。
——  分段降溫法:將菌體在不同溫級(jí)的冰箱或液氮罐口分段降溫冷卻,或懸掛于冰的氣霧中逐漸降溫,。一般采用二步控溫,,將安瓿管或塑料小管,先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小時(shí),,然后取出放入液氮罐中快速冷凍,。這樣冷凍速率大約每分鐘下降1-1.5℃。
——  對(duì)耐低溫的微生物,、可以直接放入氣相或液相氮中,。
5、  保藏
將安瓿管或塑料凍存管置于液氮罐中保藏,。一般氣相中溫度為-150℃,,液相中溫度為-196℃。
6,、  亮發(fā)光桿菌保藏周期
一般10年以上。
7,、復(fù)蘇方法
從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管,,應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止,,一般約需50秒-100秒,。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管,將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),。
Panaxtriol    含量:    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    人參三醇    20mg/支    英文名稱(chēng)    HPLC≥98%    規(guī)格:
Ciwujianoside-B    含量:    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    刺五加皂苷B    20mg/支    英文名稱(chēng)    HPLC≥98%    規(guī)格:
Syringin    含量:    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    紫丁香酚甙(刺五加甙B)    20mg/支    英文名稱(chēng)    HPLC≥98%    規(guī)格:
Eleutheroside E    含量:    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    刺五加甙E    20mg/支    英文名稱(chēng)    HPLC≥98%    規(guī)格:
Raddeanin A    含量:    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    竹節(jié)香附素A    20mg/支    英文名稱(chēng)    HPLC≥98%    規(guī)格:
亮發(fā)光桿菌

 

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