亮發(fā)光桿菌實(shí)驗(yàn)方法
1,、銅柱系統(tǒng)除氧
2,、預(yù)還原培養(yǎng)基及稀釋液的制備
制作預(yù)還原培養(yǎng)基及稀釋液時(shí)，先將配置好的培養(yǎng)基和稀釋液煮沸驅(qū)氧,，而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中,，一般瓊脂培養(yǎng)基裝4.5～5.0mL，稀釋液裝9mL,，并插入通N2氣的長(zhǎng)針頭以排除O2,。此時(shí)可以清楚的看到培養(yǎng)基內(nèi)加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍(lán)到紅zui后變成無色，說明試管內(nèi)已成為無氧狀態(tài),，然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋,，滅菌備用。
3,、分離
（1）編號(hào)
取五支無菌水試管,，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-1、10-2……10-5,。
（2）稀釋
在無菌條件下,，用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品，加入裝有預(yù)還原生理鹽水的厭氧試管中,，用震蕩器將其混合均勻,，制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中,，制成10-2稀釋液,。依此進(jìn)行10倍系列稀釋，至10-7,，制成不同樣品稀釋液,。通常選10-5、10-6,、10-7三個(gè)稀釋度進(jìn)行滾管計(jì)數(shù),。
（3）滾管分離
1）滾管
將無氧無菌的瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒溫的水浴中,，待用,，用無菌注射器吸取10-4、10-5,、10-6三個(gè)稀釋度各0 .1mL,，分別注入待用的試管中,，然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動(dòng)，帶菌的溶化瓊脂在試管內(nèi)壁會(huì)即刻形成凝固層,。
2）分離
生成的亮發(fā)光桿菌落需挑取出來，鏡檢其形態(tài)及純度,。如尚未獲得純培養(yǎng)物,，需再次稀釋滾管，并再次挑取菌落,，直至獲得純培養(yǎng)物為止,。待挑取的單菌落預(yù)先在放大鏡下觀察確定，做好標(biāo)記,。然后將培養(yǎng)基試管固定于適當(dāng)?shù)闹Ъ苌?，打開試管膠塞，同時(shí)迅速將氣流適當(dāng),、火焰滅過菌的氮?dú)忾L(zhǎng)針頭插入管內(nèi),。同時(shí)，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭,。將準(zhǔn)備好的彎頭毛細(xì)管小心插入固體培養(yǎng)基內(nèi),，找準(zhǔn)待挑菌落，輕輕吸取,，轉(zhuǎn)移至液體試管內(nèi),，加塞。37℃培養(yǎng),。培養(yǎng)24h或待培養(yǎng)液混濁后檢查已分離培養(yǎng)物的純度,。
鄰苯二甲suan丁芐酯-D4 標(biāo)準(zhǔn)品 純品型，有證書,，10mg CDEO-NF014-25mg 呋喃唑酮代謝物的衍生物2-NP-... 25mg CDCT-C16168010
連*苯/1,2,3-*基苯 1000mg/L;1ml CDGG-021128-02 1,2-二溴四氟乙烷(Hlon ... 2000mg/L;1ml CDGG-020869-05
喹氧靈 1000mg/L;1ml CDGG-031657-02 戊菌唑 1000mg/L;1ml CDGG-031836-03
奎寧 標(biāo)準(zhǔn)品 純品型,，有證書，0.1g CDDM-M884100-25mg 楊梅素 25mg CDCT-C16706900
可溶性淀粉 5g CDGG-010408-08 蔗糖 標(biāo)準(zhǔn)品 25ml CDCP-CARB-37-5g
糠醛 2000mg/L;2x0.6ml CDGG-031049-01 呋喃 1000mg/L;1ml CDGG-031264-02
亮發(fā)光桿菌
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