1.費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌鑒定的方法和步驟是什么,?
菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA,然后PCR擴(kuò)增16srDNA上GeneBank或者Eztaxon對比即可,。一般序列相似度在97%以上就可以認(rèn)為是同種細(xì)菌(當(dāng)然也有例外,,DNA序列僅僅是一個參考指標(biāo))。
2. 微生物的菌種鑒定可以鑒定到“株”一級嗎,?
如果你的菌株是自然界中分離得到,,就只能鑒定到種,不能鑒定到株,,因為多多少少和其他株系的細(xì)菌有區(qū)別,,即便你做了一些特征的鑒定,發(fā)現(xiàn)和某一株細(xì)菌一模一樣,,你也沒有理由說你的細(xì)菌就是那一株細(xì)菌,,因為你不可能把所有的特征都做完,株和株之間的關(guān)系就相當(dāng)于不同的人之間的關(guān)系,,世界上不可能有*相同的兩個人,。除非你知道你的細(xì)菌本來就是某一株細(xì)菌擴(kuò)增出來的(而且要保證沒有變異,否則就是一個新株),,可是這樣就沒必要鑒定了,。
3.為什么鑒定出來的菌種跟我想象的相差太大,?
答:我們菌種鑒定使用PCR直接擴(kuò)增的方法,即以客戶提供的菌株為模版直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增,,中間不經(jīng)過傳代培養(yǎng),,因此不會引入新的污染,如果出現(xiàn)結(jié)果不一致的情況,,一般有以下原因?qū)е拢?/p>
1,、您提供的樣品未經(jīng)過三次分離純化,含有其他雜菌,;
2,、您提供樣品的情況確認(rèn)如此。
建議您提供三次純化的菌株重新進(jìn)行鑒定,。
4.為什么有時會出現(xiàn)PCR擴(kuò)增不出的現(xiàn)象,;
答:擴(kuò)增不出的原因主要有以下幾種:
1、您提供的菌種從嚴(yán)格意義上講不是細(xì)菌或者真菌,,或者是信息有誤,;
2、您提供的菌種為革蘭氏陽性菌,,由于細(xì)胞壁較厚,,采用常規(guī)方法不能有效地破壁;
3,、培養(yǎng)基或菌體中表達(dá)產(chǎn)物含有抑制PCR產(chǎn)物的組份,。對于第二種或第三種情況需要提供基因組DNA,。
5.PCR擴(kuò)增直接測序為什么會出現(xiàn)套峰的現(xiàn)象;
答:1,、測序結(jié)果個別堿基出現(xiàn)N,,是由細(xì)菌rDNA多態(tài)性造成,對菌種鑒定沒有無影響,;
2,、所有測序反應(yīng)均出現(xiàn)大面積套峰,,是由于您提供的樣品模版不純造成的,。
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌這種情況需要重新純化菌種。
6.PCR產(chǎn)物克隆測序為什么會出現(xiàn)結(jié)果分離的現(xiàn)象,?
答:我們以菌種為模版直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增,,然后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序,如果出現(xiàn)2種或以上的測序結(jié)果,,說明您提供的模版不單一,,即菌種不純,含有其他雜菌,,這種情況建議您將菌種重新進(jìn)行三次以上純化,。
7.菌種鑒定可以鑒定到種嗎?
答:利用rRNA的保守區(qū)域進(jìn)行鑒定只是菌種鑒定的一個分子生物學(xué)指標(biāo),,通過鑒定結(jié)果可以了解未知菌株和NCBI公布序列的哪個種屬比較接近。如果費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌鑒定至種,,還需要DNA雜交,、基因組GC含量、生理生化指標(biāo)等來綜合判斷,。
YSRIBIO245 Scopoletin 東莨菪內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品 92-61-5 20mg
YSRIBIO246 Scopolamine Hydrobromide 氫溴酸東莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品 6533-68-2 250mg
YSRIBIO247 Saquinavir Related Compound A 沙奎拉韋相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
YSRIBIO248 Saquinavir Mesylate 甲磺酸沙奎拉韋標(biāo)準(zhǔn)品 149845-06-7 200mg
YSRIBIO249 Salsalate 雙水楊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 552-94-3 150mg
YSRIBIO250 Salmeterol Xinafoate 昔美酸沙美特羅標(biāo)準(zhǔn)品 94749-08-3 150mg
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌
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