費氏弧菌發(fā)光桿菌沙土保藏法操作步驟：
（1）取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機質(zhì),。
（2）倒去酸水,，用自來水沖洗至中性。
（3）烘干,，用40目篩子過篩,，以去掉粗顆粒，備用,。
（4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土,，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性,。
（5）烘干,，碾碎，通過100目篩子過篩,，以去除粗顆粒,。
（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據(jù)需要而用其他比例,，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻,，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右,，塞上棉塞,，進行滅菌，烘干,。
（7）抽樣進行無菌檢查,，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中,，37℃培養(yǎng)48小時,，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌,，再作無菌試驗,，直至證明無菌，方可備用,。
（8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長豐滿的,，營養(yǎng)細胞用此法效果不好）優(yōu)良費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種，以無菌水洗下,，制成孢子懸液,。
（9）于每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻,。
（10）放入真空干燥器內(nèi),，用真空泵抽干水分,，抽干時間越短越好，務(wù)使在12小時內(nèi)抽干,。
（11）每10支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒,，接種于斜面培養(yǎng)基上,，進行培養(yǎng)，觀察生長情況和有無雜菌生長,，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長,，則說明制作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查,。
（12）若經(jīng)檢查沒有問題,，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)干燥處保存,。每半年檢查一次活力和雜菌情況,。
（13）需要使用費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種，復(fù)活培養(yǎng)時,，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi),，置溫箱中培養(yǎng)。
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