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1.青海發(fā)光桿菌菌種制作
液體母種的制作也有較多方法,，我一般就是用小木屑加其他營養(yǎng)料,，用錐形瓶培養(yǎng)。此環(huán)節(jié)比固體菌種培養(yǎng)要更仔細一些,，特別注意細菌的監(jiān)測,，菌種環(huán)節(jié)一定要把握好。
2.培養(yǎng)液的滅菌環(huán)節(jié)
此環(huán)節(jié)要嚴格按照操作規(guī)程,，把握好每一步,，確保培養(yǎng)液滅菌*。期間注意的是,，培養(yǎng)液不能加太滿,，否則放氣的時候，液體從放氣閥沖出,。個人建議在放氣閥上再安裝一個逆止閥,，避免停電。
3.接種環(huán)節(jié)
接種環(huán)節(jié)也是很重要的環(huán)節(jié),，我們一般是將母種先鉤出來放到另一個裝有蒸餾水的大錐形瓶中,，然后再倒入培養(yǎng)罐。哥哥環(huán)節(jié)必須有大火保護,，否則容易感染,。
4.培養(yǎng)環(huán)節(jié)、監(jiān)測青海發(fā)光桿菌純度（zui重要環(huán)節(jié)）
個人認為此環(huán)節(jié)是液體菌種培養(yǎng)的中心環(huán)節(jié),，也是zui重要的環(huán)節(jié),。培養(yǎng)菌種嚴格按照操作規(guī)程,，注意每個細節(jié)。
（1）空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管要一起提前滅菌,，建議在空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管間安裝一個逆止閥,，防止培養(yǎng)液倒流，這是很關(guān)鍵的,，否則培養(yǎng)時因為內(nèi)外壓力差變化,，培養(yǎng)液容易回流。
（2）監(jiān)測菌種純度,。這一步是至關(guān)重要的環(huán)節(jié),，此步驟將直接決定你的成敗，監(jiān)測不好可能會導(dǎo)致全軍覆沒,。監(jiān)測菌種純度有以下幾種方法：
a.看：看培養(yǎng)液是否透明澄清,，菌球是否均勻。培養(yǎng)液不能渾濁,。用試管或錐形瓶,，從下面接出少量液體（注意，一定要在大火焰的保護下進行）,，觀察菌球是否懸浮,，不能在短時間內(nèi)下沉或上浮。
b.聞：聞放氣閥處是否有菌絲的純香,，不能是其他酒精味,、酸味甚至惡臭，要回辨別霉菌和細菌感染時不同的氣味,。
c.顯微鏡觀察：顯微鏡觀察一些霉菌的特征,，平時可以將已經(jīng)確定的液體菌拿來觀察練習，借助一些教材,，對比觀察,，這是經(jīng)驗累積才能確定的，但也是*的,。顯微鏡具體使用方法本論壇有介紹,。
d.培養(yǎng)監(jiān)測：這一步是zui簡單也是zui直觀的，直接反應(yīng)了該菌種是否純凈,。具體操作如下：提前做好試管或錐形瓶瓊脂培養(yǎng)基,，并提前做好滅菌工作，再用此小錐形瓶或試管,，在培養(yǎng)罐的下面放料處,，接少量的培養(yǎng)液（這一步兩人操作，一個人負責火焰保護，一個人負責接液體）,，整個過程在火焰的保護下塞上棉塞,。傾斜放置，讓部分瓊脂露出培養(yǎng)液,?？刂茰囟龋?-2天即可觀察,，霉菌和細菌都可以盡收眼底,，如果有感染,，培養(yǎng)罐全體培養(yǎng)液應(yīng)及時放棄,，否則后果很嚴重。
5.接種環(huán)節(jié)
青海發(fā)光桿菌首先確保液體菌種純凈且旺盛的前提下,，再討論接種環(huán)節(jié),。接種也是液體菌種較為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，因為菌種含水量大,，操作中很容易感染空氣中的雜菌,。我把我的接種方法透露一下，希望對您有幫助,。接種操作：五人一組,，每一組一把接種槍，五個酒精燈,。一個人專門負責接種槍的把握注射菌種,，其余四人負責打開袋口（菌袋用無棉蓋封口，便于操作）,。每人面前一個酒精燈,，酒精燈火焰一定要大，大到可以包圍無棉蓋口,。接種時,，在火焰上打開蓋口，在火焰上接種,，接完后,，在火焰上蓋上蓋口，整個環(huán)節(jié)要迅速,，否則火焰要把菌袋燒壞,。接種槍在沒有用的時候?qū)⒄麄€槍頭放在火焰上，避免在空氣中放置,。 整個操作環(huán)節(jié)保險度*,，對接種室的滅菌要求不高。