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1.青海發(fā)光桿菌菌種制作
液體母種的制作也有較多方法，我一般就是用小木屑加其他營(yíng)養(yǎng)料,，用錐形瓶培養(yǎng),。此環(huán)節(jié)比固體菌種培養(yǎng)要更仔細(xì)一些，特別注意細(xì)菌的監(jiān)測(cè),，菌種環(huán)節(jié)一定要把握好,。
2.培養(yǎng)液的滅菌環(huán)節(jié)
此環(huán)節(jié)要嚴(yán)格按照操作規(guī)程，把握好每一步,，確保培養(yǎng)液滅菌*,。期間注意的是，培養(yǎng)液不能加太滿,，否則放氣的時(shí)候,，液體從放氣閥沖出。個(gè)人建議在放氣閥上再安裝一個(gè)逆止閥,，避免停電,。
3.接種環(huán)節(jié)
接種環(huán)節(jié)也是很重要的環(huán)節(jié)，我們一般是將母種先鉤出來(lái)放到另一個(gè)裝有蒸餾水的大錐形瓶中,，然后再倒入培養(yǎng)罐,。哥哥環(huán)節(jié)必須有大火保護(hù)，否則容易感染,。
4.培養(yǎng)環(huán)節(jié),、監(jiān)測(cè)青海發(fā)光桿菌純度（zui重要環(huán)節(jié)）
個(gè)人認(rèn)為此環(huán)節(jié)是液體菌種培養(yǎng)的中心環(huán)節(jié)，也是zui重要的環(huán)節(jié),。培養(yǎng)菌種嚴(yán)格按照操作規(guī)程,，注意每個(gè)細(xì)節(jié)。
（1）空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管要一起提前滅菌,，建議在空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管間安裝一個(gè)逆止閥,，防止培養(yǎng)液倒流，這是很關(guān)鍵的,，否則培養(yǎng)時(shí)因?yàn)閮?nèi)外壓力差變化,，培養(yǎng)液容易回流。
（2）監(jiān)測(cè)菌種純度,。這一步是至關(guān)重要的環(huán)節(jié),，此步驟將直接決定你的成敗，監(jiān)測(cè)不好可能會(huì)導(dǎo)致全軍覆沒,。監(jiān)測(cè)菌種純度有以下幾種方法：
a.看：看培養(yǎng)液是否透明澄清,，菌球是否均勻,。培養(yǎng)液不能渾濁。用試管或錐形瓶,，從下面接出少量液體（注意,，一定要在大火焰的保護(hù)下進(jìn)行），觀察菌球是否懸浮,，不能在短時(shí)間內(nèi)下沉或上浮,。
b.聞：聞放氣閥處是否有菌絲的純香，不能是其他酒精味,、酸味甚至惡臭,，要回辨別霉菌和細(xì)菌感染時(shí)不同的氣味。
c.顯微鏡觀察：顯微鏡觀察一些霉菌的特征,，平時(shí)可以將已經(jīng)確定的液體菌拿來(lái)觀察練習(xí),，借助一些教材，對(duì)比觀察,，這是經(jīng)驗(yàn)累積才能確定的,，但也是*的。顯微鏡具體使用方法本論壇有介紹,。
d.培養(yǎng)監(jiān)測(cè)：這一步是zui簡(jiǎn)單也是zui直觀的,，直接反應(yīng)了該菌種是否純凈。具體操作如下：提前做好試管或錐形瓶瓊脂培養(yǎng)基,，并提前做好滅菌工作,，再用此小錐形瓶或試管，在培養(yǎng)罐的下面放料處,，接少量的培養(yǎng)液（這一步兩人操作,，一個(gè)人負(fù)責(zé)火焰保護(hù)，一個(gè)人負(fù)責(zé)接液體）,，整個(gè)過程在火焰的保護(hù)下塞上棉塞,。傾斜放置，讓部分瓊脂露出培養(yǎng)液,?？刂茰囟龋?-2天即可觀察,，霉菌和細(xì)菌都可以盡收眼底，如果有感染,，培養(yǎng)罐全體培養(yǎng)液應(yīng)及時(shí)放棄,，否則后果很嚴(yán)重。
5.接種環(huán)節(jié)
青海發(fā)光桿菌首先確保液體菌種純凈且旺盛的前提下,，再討論接種環(huán)節(jié),。接種也是液體菌種較為關(guān)鍵的環(huán)節(jié),，因?yàn)榫N含水量大，操作中很容易感染空氣中的雜菌,。我把我的接種方法透露一下,，希望對(duì)您有幫助。接種操作：五人一組,，每一組一把接種槍,，五個(gè)酒精燈。一個(gè)人專門負(fù)責(zé)接種槍的把握注射菌種,，其余四人負(fù)責(zé)打開袋口（菌袋用無(wú)棉蓋封口,，便于操作）。每人面前一個(gè)酒精燈,，酒精燈火焰一定要大,，大到可以包圍無(wú)棉蓋口。接種時(shí),，在火焰上打開蓋口,，在火焰上接種，接完后,，在火焰上蓋上蓋口,，整個(gè)環(huán)節(jié)要迅速，否則火焰要把菌袋燒壞,。接種槍在沒有用的時(shí)候?qū)⒄麄€(gè)槍頭放在火焰上,，避免在空氣中放置。 整個(gè)操作環(huán)節(jié)保險(xiǎn)度*,，對(duì)接種室的滅菌要求不高,。