1.費氏弧菌發(fā)光桿菌工藝流程
保藏菌種一菌種活化→三角瓶種子→一級種子液→發(fā)酵培養(yǎng)基配料混合→培養(yǎng)基滅菌→冷卻→接種→發(fā)酵床通風(fēng)培養(yǎng)→費氏弧菌發(fā)光桿菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物
2.種子液的制備
(1)斜面菌種活化將費氏弧菌發(fā)光桿菌的保藏菌種在試管斜面培養(yǎng)基上劃線接種,,于37℃培養(yǎng)18~20 h,使費氏弧菌發(fā)光桿菌活化,;試管斜面培養(yǎng)基可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,。
(2)三角瓶種子制備將活化的費氏弧菌發(fā)光桿菌斜面菌種接種到裝有費氏弧菌發(fā)光桿菌液體培養(yǎng)基三角瓶中,于35~37℃,,180~200 r/min,,搖床18~20 h,得到費氏弧菌發(fā)光桿菌三角瓶種子液,;費氏弧菌發(fā)光桿菌液體培養(yǎng)基可用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基,。
(3)一級種子液先按照后述的配方配制一級種子液體培養(yǎng)基,pH 7.0~7.2,,經(jīng)121℃,,滅菌30 min,冷卻到37℃,然后將得到的費氏弧菌發(fā)光桿菌三角瓶種子液以0.3 9/6~O.5 9/5的接種量接種于所用的一級種子罐中,,于37℃培養(yǎng)24 h得到費氏弧菌發(fā)光桿菌的一級種子液,;所述的一級種子液體培養(yǎng)基配方為:豆粘30 g/L、紅糖5 g/L、淀粉2.5 g/L,、MgSO4 0.5 g/L,、MnSO4 1.5 g/L、K2HPO4 2 g/L,、KH2 P041.5 g/L,、CaCO30.1 g/L,調(diào)節(jié)pH 7.0,。
3.發(fā)酵床淺盤培養(yǎng)
(1)發(fā)酵床結(jié)構(gòu) 長度5.5~8.0 m,,寬度1.5~2.5 m,高度O.5~0.6 m,。
(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制和滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基采用麩皮稻殼培養(yǎng)基,,麩皮和稻殼按5:1(質(zhì)量比)混合,再按1:(1.2~1.3)的料水比加入水混合均勻,,不能有大的結(jié)塊,,以免滅菌不*?;旌暇鶆蚝蟮呐囵B(yǎng)基放入旋轉(zhuǎn)蒸煮鍋滅菌60~90 min,。
(3)接種將獲得的費氏弧菌發(fā)光桿菌一級種子液以10%~15%的接種量接種于經(jīng)滅菌降溫至40~50℃的費氏弧菌發(fā)光桿菌固體培養(yǎng)基中,料菌均勻后堆積1~2 h,,上發(fā)酵床攤平,,厚度30~35 cm。
(4)費氏弧菌發(fā)光桿菌發(fā)酵過程控制整個發(fā)酵過程分兩個階段,,*階段(1~22 h):1~10 h靜止期,,10 h后間斷通風(fēng)控制溫度在37℃,20 h左右*次翻曲,;第二階段(23~40 h):28~30 h第二次翻曲,,控制溫度在37℃,直至發(fā)酵結(jié)束,。發(fā)酵期間定時鏡檢,,當(dāng)芽孢率達到80%以上停止發(fā)酵,60℃低溫烘干,。
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