亮發(fā)光桿菌菌種如何證明進(jìn)行了傳代
1.菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料,，亮發(fā)光桿菌在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,，診斷制品的制備,，菌苗的,、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種.微生物具有生命活力,，在傳代過程中易發(fā)生變異甚至死亡,，因此菌種傳代與保藏是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工作。
2.把凍干菌種管,、滅菌1ml滴管,、雙碟、鑷子,、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺(tái),。
3.先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用75%乙醇擦洗消毒,、稍干,，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi),，待干,。點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上,，燒灼紅熱,，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂,。
4.取滅菌鑷子,，在火焰旁，將炸裂的管口打開,，放入滅菌雙碟內(nèi),，另取1支滅菌滴管，在火焰旁吸取營(yíng)養(yǎng)肉湯少許,，加至菌種管底部,，將凍干菌攪動(dòng)促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液,，亮發(fā)光桿菌分別接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi),，并將滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營(yíng)養(yǎng)肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面進(jìn)行培養(yǎng),。
5.點(diǎn)燃酒精燈,，用左手握住菌種斜面，將管口靠進(jìn)火焰旁,，右手拿接種棒后端,，將接種環(huán)燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼,，往返通過3次,。左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手用無名指,、小指及掌部夾住棉塞,，撥開棉塞，將接種環(huán)伸人管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,，稍冷卻再移至菌苔上,，刮去少量菌苔，隨即取出接種棒,，并將菌種管口移至火焰旁,。
6.堵上棉塞，左手將菌種管放下,，取營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面1支,，照上述操作打開棉塞,，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部，由底向上,，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動(dòng),，使細(xì)菌劃在斜面的表面上。
7.菌種斜面?zhèn)鞔僮?br />8.培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備,，如斜面已無冷凝水者,，不宜再使用。標(biāo)簽上注明菌種名及菌種編號(hào),。至冰箱取出的菌種斜面,，應(yīng)在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺(tái),。
9.取出接種棒,，在火焰旁將培養(yǎng)基管棉塞堵上，然后將接種過細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌,。
10.菌種的培養(yǎng)與保存
11.大腸桿菌35~37℃培養(yǎng)48小時(shí)
金黃色葡萄球菌30~35℃培養(yǎng)48小時(shí)枯草芽孢桿菌30~35℃培養(yǎng)48小時(shí)白色念珠菌23~28℃培養(yǎng)7天黑曲霉23~28℃培養(yǎng)7天
12.將培養(yǎng)物管自培養(yǎng)箱取出后放人冰箱(2-8℃)保存,，一般2個(gè)月轉(zhuǎn)種一次。4.5菌液的制備
13.取上述培養(yǎng)好的營(yíng)養(yǎng)肉湯菌懸液(濃菌液)1ml,，加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻,，為10-1，再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液混勻,，為10-2……以此類推,，稀釋至含活菌數(shù)在50~100個(gè)。用平板計(jì)數(shù),。
14.取上述培養(yǎng)好的菌種斜面移入接種室或凈化工作臺(tái),，放置室溫后,用接種環(huán)取菌苔少許接種置營(yíng)養(yǎng)肉湯中(10ml/支,已滅菌),將已接種畢的細(xì)菌管置35℃~37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，取出備用,。一般于冰箱中保存可用兩周,。
15.此稀釋菌液用于試驗(yàn)后加陽性對(duì)照，可在一周內(nèi)使用,。
16.傳代和接種使用后,，亮發(fā)光桿菌應(yīng)做好《菌種傳代接種記錄》。
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