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分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法

本技術(shù)方案采用了一種分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭后,，用燒灼的刀具從菌柄頂端在

火焰上方切割掉子實(shí)體頭部,，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過(guò)2-4下,，用刀具在新鮮菌柄內(nèi)側(cè)環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織并送入抗生素平板培養(yǎng)荃上,，于20-30℃的溫度下培養(yǎng)，待萌發(fā)出菌絲后,，及時(shí)轉(zhuǎn)接,。

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)體在切割前要基部菌柄完整,，用透明膠把費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌整個(gè)纏繞密封，中間不留空隙,。

所述的抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g,，磷酸二氫鉀lg,硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g，瓊脂20g,、水1000mL,鏈霉素30U/mL,，青霉素30U/mL, pH6.5

所述抗生素平板培養(yǎng)基的制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，過(guò)濾取2000mL,，加入草炭,，小火浸煮20min，過(guò)濾取濾液1000mL,，在此濾液中加入葡萄糖,、酵母膏、瓊脂,、磷酸二氫鉀,、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解,，定容至1000mL,，分裝于三角瓶，在高溫121℃-126'C,高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min,。待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉,、硫酸鏈霉素復(fù)合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/ml.左右,，將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基,。

本技術(shù)的分離方法，先是對(duì)費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌進(jìn)行封閉式消毒,，防止消毒酒精浸入菌組織,，有利分離成功。另外,，割掉子實(shí)體頭部后,，露出的菌柄內(nèi)側(cè)為無(wú)菌組織，環(huán)割取內(nèi)側(cè)菌肉組織防雜效果較好,。采用抗生素培養(yǎng)基也有利于防止雜菌污染,，培養(yǎng)基的組分營(yíng)養(yǎng)非常全面，特別是加入草炭和酵母膏,，為費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌絲生長(zhǎng)提供了保證,。本發(fā)明的整個(gè)操作過(guò)程不用消毒液，全用火焰消毒,，萌發(fā)率較高,，既保證了容易萌發(fā),，同時(shí)也能降低污染，并能較順利的分離到費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種,。

本實(shí)施例的分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種的方法,，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%
消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的手術(shù)刀片從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實(shí)體頭部,，露出的新鮮菌柄橫切面,，在火焰上輕快過(guò)兩下。用手術(shù)刀在新鮮菌柄內(nèi)側(cè)環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織送入抗生素平板培養(yǎng)基上,，25℃培養(yǎng),，待萌發(fā)出菌絲后,，及時(shí)轉(zhuǎn)接,。抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,，草炭l00g,葡萄糖20g,，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g,，瓊脂20g,、水1000mL，鏈霉素30U/mL,，青霉素30U/mL, pH6.5,，其制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，過(guò)濾取2000mL,，加入草炭,，小火浸煮20min，過(guò)濾取濾液I000ml,在此濾液中加入葡萄糖,、酵母膏,、瓊脂、磷酸二氫鉀,、硫酸鎂,，小火煮至瓊脂溶解，定容至1000mL,，分裝于三角瓶,，在高溫121℃-126℃、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min,。

待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉,、硫酸鏈霉素復(fù)合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右,，將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基,。其中,，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌整個(gè)纏繞密封,，中間不留空隙,。