ELISA試劑盒實驗的完善
①:評估試劑的實用性,,試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,,應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用,。
②:操作前仔細閱讀說明書,,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用,。值得改進的地方,,反復(fù)試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等,。
③:加樣要準確,、快速。加樣不準確,,酶生成物的量不能確定,,直接影響顯色結(jié)果。另外,,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),,所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,,如果加樣遲緩,,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,,尤其室溫過高時,,保存期會縮短甚至失效。
④:檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗,。能熟練操作實驗儀器,、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決,。
⑤:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差,。移液器準確與否對定量檢測尤為重要,。
⑥:嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,,加入終止液反應(yīng)終止后,,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性,。超過顯色要求時間后顯色,,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān),。加顯色劑后立即顯色,,不可報陽性,,這可能是本底顯色的結(jié)果。
⑦:洗滌*,,洗板不*,,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外,,洗滌液要新鮮,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,,也可能出現(xiàn)假陽性。
⑧:嚴控反應(yīng)時間,,反應(yīng)時間過長,,酶失活;反應(yīng)時間過短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,,都可能造成假陰性,。
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