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豬ELISA試劑盒的操作步驟

閱讀:1054      發(fā)布時(shí)間:2016-8-22
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豬ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。
    豬ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬生長(zhǎng)激素(GH)水平,。用純化的豬生長(zhǎng)激素(GH)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入生長(zhǎng)激素(GH),,再與HRP標(biāo)記的生長(zhǎng)激素(GH)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長(zhǎng)激素(GH)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬生長(zhǎng)激素(GH)濃度。

 

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