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豬ELISA試劑盒的操作步驟

閱讀:1180      發(fā)布時間:2016-8-22
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豬ELISA試劑盒標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
    豬ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬生長激素(GH)水平,。用純化的豬生長激素(GH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入生長激素(GH),再與HRP標記的生長激素(GH)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的生長激素(GH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品中豬生長激素(GH)濃度,。

 

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