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ELISA試劑盒雙抗夾心法的重點需知:
.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃ 。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌,。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+",、“-"號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。