ELISA試劑盒雙抗夾心法的重點(diǎn)需知:
.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌,，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。
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