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技術(shù)文章

微生物檢測中常用的滅菌和消毒方法

閱讀：2655發(fā)布時(shí)間：2020-9-24

　　消毒和滅菌兩個(gè)詞在實(shí)際使用中常被混用，其實(shí)它們的含義是有所不同的,。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法,，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài),。

　　一,、物理方法

　　1、溫度

　　利用溫度進(jìn)行滅菌,、消毒或防腐,，是常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活,，從而起滅菌作用,，低溫通常起抑菌作用。

　　干熱滅菌法：

　　a.灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死,。此法*可靠,，滅菌迅速，但易焚毀物品,，所以使用范圍有限,，只適合于接種針、環(huán),、試管口及不能用的污染物品或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物的尸體等的滅菌,。

　　b.干熱空氣滅菌法：這是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中,，升溫至160℃,，恒溫1小時(shí)即可,。此法適用于玻璃皿,、金屬用具等的滅菌,。

　　濕熱滅菌法：

　　在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好,，這是因?yàn)橐环矫婕?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高,，容易變性。另一方面高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有高度的穿透力,，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡,。

　　a.巴氏消毒法：有些食物會(huì)因高溫破壞營養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶,、醬油,、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物,，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風(fēng)味,，又進(jìn)行了消毒，保證了食品衛(wèi)生,。該法一般在62℃,，30分鐘即可達(dá)到消毒目的。此法為法國微生物學(xué)家巴斯德,，故名為巴氏消毒法,。

　　b.煮沸消毒法：直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鐘,，即可殺死細(xì)菌的全部營養(yǎng)和部分芽孢,。若在清水中加入1%碳酸鈉或2%的石炭酸，則效果更好,。此法適用于注射器,、毛巾及解剖用具的消毒。

　　c.間歇滅菌法：上述兩種方法在常壓下,，只能起到消毒作用,，而很難做到*無菌。若采用間歇滅菌的方法,，就能殺滅物品中所有的微生物,。具體做法是：將待滅菌的物品加熱至100℃，15~30分鐘,，殺死其中的營養(yǎng)體,。然后冷卻，放入37℃恒溫箱中過夜,，讓殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體,。第2天再重復(fù)上述步驟,，三次左右，就可達(dá)到滅菌的目的,。此法不需加壓滅菌鍋,，適于推廣，但操作麻煩,，所需時(shí)間長,。

　　d.加壓蒸汽滅菌法：這是發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健,、食品檢測和微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常用的一種滅菌方法,。它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌,，也適用于玻璃器皿,、工作服等物品的滅菌。

　　加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的,，以大量蒸汽使其中壓力升高,。由于蒸汽壓的上升，水的沸點(diǎn)也隨之提高,。在蒸汽壓達(dá)到1.055公斤/厘米2時(shí),，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達(dá)到121℃。在這種情況下,，微生物(包括芽孢)在15~20分鐘便會(huì)被殺死,，而達(dá)到滅菌目的。如滅菌的對(duì)象是砂土,、石蠟油等面積大,、含菌多、傳熱差的物品,，則應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時(shí)間,。

　　在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的一個(gè)問題是,，在恒壓之前,，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對(duì)應(yīng)關(guān)系,，這樣會(huì)大大降低滅菌效果,。

　　03 影響滅菌的因素：

　　a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對(duì)高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營養(yǎng)體和病毒在50~65℃,，10分鐘就會(huì)被殺死,；但各種孢子、特別是芽孢能抗熱,，其中抗熱性強(qiáng)的是嗜熱脂肪芽孢桿菌,，要在121℃,，12分鐘才被殺死。對(duì)同種微生物來講,，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感,。

　　b.微生物的數(shù)量多少顯然會(huì)影響滅菌的效果，數(shù)量越多,，熱死時(shí)間越長,。

　　c.培養(yǎng)基的成分與組成也會(huì)影響滅菌效果,。一般地講,，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在,，則提高抗熱性,，pH在7附近，抗熱性強(qiáng),，偏向兩極,，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對(duì)滅菌產(chǎn)生不同的影響,；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時(shí)間長,。

　　滅菌對(duì)培養(yǎng)基成分的影響：

　　a.pH值普遍下降。

　　b.產(chǎn)生混濁或沉淀,，這主要是由于一些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀,。例如Ca+2與PO4-3化合，就會(huì)產(chǎn)生磷酸鈣沉淀,。

　　c.不少培養(yǎng)基顏色加深,。

　　d.體積和濃度有所變化。

　　e.營養(yǎng)成分有時(shí)受到破壞,。

　　2,、輻射

　　利用輻射進(jìn)行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點(diǎn),，所以應(yīng)用越來越廣,，目前主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面：

　　1)接種室、手術(shù)室,、食品,、藥物包裝室常應(yīng)用紫外線殺菌。

　　2)應(yīng)用β射線作食品表面殺菌,，γ射線用于食品內(nèi)部殺菌,。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅,，再用冷凍保藏,，可使保存期延長,。

　　3、過濾

　　采用機(jī)械方法,，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子,，做成各種過濾器。通過過濾,，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下,，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達(dá)到除菌的目的,。這種滅菌方法適用于一些對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌,。它的大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細(xì)菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi),，有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來一定的麻煩,。

　　二、化學(xué)方法

　　一般化學(xué)藥劑無法殺死所有的微生物,，而只能殺死其中的病原微生物,，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑,。

　　能迅速殺滅病原微生物的藥物,，稱為消毒劑。能抑制或阻止微生物生長繁殖的藥物,，稱為防腐劑,。但是一種化學(xué)藥物是殺菌還是抑菌，常不易嚴(yán)格區(qū)分,。消毒劑在低濃度時(shí)也能殺菌(如1：1000硫柳汞),。由于消毒防腐劑沒有選擇性，因此對(duì)一切活細(xì)胞都有毒性,，不僅能殺死或抑制病原微生物,，而且對(duì)人體組織細(xì)胞也有損傷作用，所以只能用于體表,、器械,、排泄物和周圍環(huán)境的消毒。

　　常用的化學(xué)消毒劑有：石碳酸,、來蘇水(甲醛溶液),、碘酒、酒精等,。

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