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羊糖原(Glycogen)ELISA試劑盒實驗操作原理

本試劑盒僅供研究使用。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中羊糖原(Glycogen)水平,。用純化的羊糖原(Glycogen)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入糖原(Glycogen),，再與HRP標記的糖原(Glycogen)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的糖原(Glycogen)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中羊糖原(Glycogen)濃度,。

羊糖原(Glycogen)ELISA試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

1200pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

600pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

300pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

150pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

75pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同),、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

羊糖原(Glycogen)ELISA試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照羊糖原(Glycogen)ELISA試劑盒說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

羊糖原(Glycogen)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月