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兔前列腺素F2a （PGF2a）elisa試劑盒操作步驟
兔前列腺素F2a (PGF2a)elisa試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔， 再在第三,、 第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。 （稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 180ng/L,，120ng/L ,，60ng/L，30ng/L,， 15ng/L） ,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣
品孔,。 在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣
品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） ,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。