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人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

本試劑盒僅供研究使用,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)水平,。用純化的人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α),，再與HRP標記的轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)濃度,。

人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

3200ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

1600ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

800ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

400ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

200ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl,，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間zuihao控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，zuihao做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔diyi孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)酶聯(lián)免疫試劑盒說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月