液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一,，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。液相色譜儀在使用過(guò)程中，難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題,，并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作,。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的方法,，就可正確地使用儀器并zui大限度地發(fā)揮液相色譜儀的性能,。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問(wèn)題。

一,、流動(dòng)相(MOBLLE PHASE)的問(wèn)題

     甲醇和乙腈在液相色譜分析法中常常被用來(lái)配制流動(dòng)相,。液相色譜法中常用的試劑是高等級(jí)的試劑，如色譜純?cè)噭?。在要求不太?yán)格時(shí),，優(yōu)級(jí)純甚至分析純的試劑也能用。液相色譜分析法中常用的是紫外檢測(cè)器,，因此,，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來(lái)考慮，應(yīng)該使用紫外吸收小且雜質(zhì)含量少的色譜純?cè)噭?/span>

 1,、流動(dòng)相的過(guò)濾,。配制好的流動(dòng)相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來(lái)過(guò)濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒,，如果不把它們?yōu)V除掉,，就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過(guò)濾器,，這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道,，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高,，柱效下降,。碰到這種情況時(shí)，要換用經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相,，并將堵塞的濾器拆下來(lái)浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘,，以除去濾片上的堵塞物。

 2,、流動(dòng)相的脫氣,。流動(dòng)相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體,，否則,，這些氣體會(huì)使柱填料的性能降低，還能夠?qū)z測(cè)器的信號(hào)產(chǎn)生很大的干擾,。脫氣有多種方法,，如超聲脫氣,、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾?。真空脫氣法和氮?dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳皕ui常用的脫氣法,。水和甲醇混合后會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用,，氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測(cè)器,，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。

二,、使用試管的問(wèn)題

 1,、試管的潔凈問(wèn)題。液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法,，如果因使用不潔凈的試管,，便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如,，在用甲醇作溶劑來(lái)溶解樣品時(shí),，所用的小試管是用橡膠塞來(lái)做蓋子的，因此,，在每次進(jìn)樣時(shí),，都有一個(gè)保留時(shí)間固定的干擾峰存在，后經(jīng)證實(shí),，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產(chǎn)生,，換用玻璃試管后，干擾峰消除,。

 2、塑料試管的溶解問(wèn)題,。近年來(lái),，一次性塑料試管給試驗(yàn)人員帶來(lái)了極大的方便，但是,，在使用過(guò)程中一定要注意有機(jī)溶劑對(duì)試管的溶解現(xiàn)象,，在利用此種試管提取樣品時(shí)，有些有機(jī)溶劑對(duì)管壁有溶解現(xiàn)象,，這些被溶解下來(lái)的物質(zhì)有時(shí)也能在檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào),，從而干擾樣品的測(cè)定。這時(shí),，可用相同的實(shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下,，看看不含被抽提物時(shí)，提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào),，如確有干擾信號(hào)存在,，就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。

 3、被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問(wèn)題,。這個(gè)問(wèn)題也應(yīng)引起注意,，否則也會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中,，因此,，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生,，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑,，可有效地防止吸附。

三,、操作進(jìn)樣閥的問(wèn)題

   目前,，在分析型液相色譜儀中常用的進(jìn)樣閥是7725型進(jìn)樣閥，其內(nèi)部的六通閥結(jié)構(gòu)使進(jìn)樣操作非常方便,，但是,，如果使用不當(dāng)，也會(huì)帶來(lái)問(wèn)題,。例如,，在液相色譜法的試驗(yàn)過(guò)程中，有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問(wèn)題,，這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起,，要想解決此類問(wèn)題，需從以下幾個(gè)方面入手,。

 1,、進(jìn)樣量的控制。用進(jìn)樣閥來(lái)進(jìn)樣時(shí),，閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的,，(一般分析型進(jìn)樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進(jìn)樣時(shí),，注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快),。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液,，從而使用進(jìn)樣閥來(lái)準(zhǔn)確地定量,，則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來(lái)控制進(jìn)樣量,，則zui大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量,，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差。

 2,、進(jìn)樣閥的清潔問(wèn)題,。如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留,，必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品，為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生,，應(yīng)按下列步驟操作：a.進(jìn)樣閥有2個(gè)位置,，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí),，以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次,，每次用量大約40ul；b.然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí),，再以流動(dòng)相清洗幾次,，每次用量還是40ul；c.zui后,，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里,。

     按照上述的步驟操作，可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染,，從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

 3、進(jìn)樣閥溢流管的堵塞,。有時(shí),，進(jìn)樣閥的溢流管會(huì)發(fā)生堵塞現(xiàn)象，向進(jìn)樣閥內(nèi)注射樣品時(shí),，注射針推不動(dòng),。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液,，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致,。此時(shí)，可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡,，端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉,，故障排除。如能在每次進(jìn)樣完成之后,，用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生,。