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“色譜是一種分離分析手段,,分離是核心,,因此,擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。色譜柱由柱管,、壓帽、卡套(密封環(huán)),、篩板(濾片),、接頭、螺絲等組成,沒(méi)有色譜柱就不能進(jìn)行分離,、定性與定量了,,色譜柱是根據(jù)柱子里的填充物不同來(lái)區(qū)別的,填充物又是根據(jù)需要分離的物質(zhì)的極性來(lái)選擇的,。
1.色譜柱的使用說(shuō)明:
(1)色譜柱使用前注意事項(xiàng):
色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明,,均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前,,一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶,。在反相色譜中,如,,用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,,堵塞色譜柱,。
(2)流動(dòng)相:
流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水,。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換,。以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0~8.0,BDSC18適合于堿性化合物,,pH值適用范圍為2.0~10.0,。當(dāng)必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí),每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,,并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相,。
(3)樣品:
樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,;
若樣品不便處理,,要使用保護(hù)柱,在用正相色譜法分析樣品時(shí),,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水,。
2.色譜柱的保存:
(1)反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng):
使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,,洗掉色譜柱中的鹽,,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,,防止將填料沖塌陷,。
(2)長(zhǎng)期保存色譜柱:
如果色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存,必須存于合適的溶劑下,。對(duì)于反相柱可以?xún)?chǔ)存于純甲醇或乙腈中,,正相柱可以?xún)?chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以?xún)?chǔ)存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,,并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上,,儲(chǔ)存的溫度是室溫。
3.色譜柱的再生因?yàn)樯V柱是消耗品,,隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,,會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,,一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降,。
(1)反相柱的再生:
依次采用20~30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90(V/V),乙腈,,異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱,,完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
(2)正相柱的再生:
依次以20~30倍色譜柱的體積的正己烷,、異丙醇,、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱,,然后再以相反的順序沖洗色譜柱,。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。
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