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伯樂轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟
閱讀：3917 發(fā)布時間：2016-7-6
伯樂轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟：
全程請戴手套操作，以免污染伯樂轉(zhuǎn)印槽,！
1）電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉(zhuǎn)印緩沖液中,，洗2~3 次，每次10min.
2）取出伯樂轉(zhuǎn)印槽,，先小心放一攪拌子在底部,，再倒一半轉(zhuǎn)印緩沖液。
3）取轉(zhuǎn)印紙切成約如膠片大小,，先在方形培養(yǎng)皿中以少許甲醇浸濕數(shù)秒鐘,，再置入伯樂轉(zhuǎn)印槽中的緩沖液10 min 后使用,。 另取兩張濾紙，以及兩片方形海綿墊,，都放在伯樂轉(zhuǎn)印槽的緩沖液中備用,。
4）取出轉(zhuǎn)印夾打開平放,，先墊一張方形海棉墊,，鋪上一張濕濾紙，小心平鋪SDS-PAGE膠上去,，然后小心迭上已潤濕的轉(zhuǎn)印紙,，用涂菌玻璃棒趕出氣泡；轉(zhuǎn)印紙再滴上數(shù)滴緩沖液后,，加蓋一層濾紙,，及另一張海綿，也都不可陷入氣泡,，即可把整個轉(zhuǎn)印三明治卡夾裝好,。
膠迭到轉(zhuǎn)印紙時，一次成功,，不要重作,，否則蛋白質(zhì)色帶可能會印上去，后產(chǎn)生重迭影像,。
5）將轉(zhuǎn)印三明治置入已經(jīng)放有一半轉(zhuǎn)印緩沖液的伯樂轉(zhuǎn)印槽中,，注意有轉(zhuǎn)印紙的那一面向正極（紅色），膠片那面向負極（黑色）,。
6）當三明治都放入伯樂轉(zhuǎn)印槽后,，以轉(zhuǎn)印緩沖液蓋滿所有的三明治，小心動一動卡夾,，除去附在卡夾內(nèi)外的氣泡,，蓋上蓋子，放到一攪拌器上,，打開攪拌器開始攪拌,，同時接好電源，裝置完成后放置10 min.
7）以300mA開始轉(zhuǎn)印,，溫度會漸漸上升,，轉(zhuǎn)印1.5 h左右 后中止轉(zhuǎn)印，取出轉(zhuǎn)印三明治,，打開后依次取出轉(zhuǎn)印紙及膠,。
具體轉(zhuǎn)印條件要根據(jù)蛋白的大小進行優(yōu)化，注意低溫,。
8）轉(zhuǎn)印后的膠片可以繼續(xù)進行染色,，看有無蛋白質(zhì)殘留,。若電泳時加有藍色標準蛋白質(zhì)marker（SeeBlue），則可在轉(zhuǎn)印紙上看到藍色的色帶,，確定轉(zhuǎn)印成功,，并可評估轉(zhuǎn)印效率。