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MaxCyte電轉(zhuǎn)：開啟角化細(xì)胞工程化之門,，重塑皮膚治療未來
內(nèi)容摘要
(1) 角化細(xì)胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚,、口腔和耳部疾病方面具有潛力。
(2) 成年角化細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增容易,，適合自體和同種異體細(xì)胞治療產(chǎn)品,。
(3) 之前限制：成年角化細(xì)胞缺乏高效的轉(zhuǎn)染方法。
(4) 本研究目標(biāo)：開發(fā)符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的,、可擴(kuò)展的細(xì)胞工程流程,，使用MaxCyte®電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染來自四個(gè)不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)流程
• 從全皮樣,、鼓膜,、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細(xì)胞,。
• 胞培養(yǎng),、擴(kuò)增、冷凍保存,、基因工程,、驗(yàn)證，最終形成細(xì)胞治療產(chǎn)品,。
主要發(fā)現(xiàn)
• 使用MaxCyte技術(shù),，高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細(xì)胞，不損害細(xì)胞活性,、形態(tài)或生長(zhǎng)能力,。
上圖：使用MaxCyte ATx電轉(zhuǎn)儀對(duì)原代包皮角化細(xì)胞進(jìn)行mRNA-GFP或ATTO550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率,。
上圖：使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,，電轉(zhuǎn)后細(xì)胞增殖幾乎不受影響。
上圖：使用MaxCyte ATx儀器對(duì)來自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細(xì)胞、扁桃體來源的口腔角化細(xì)胞和鼓膜 (中耳) 角化細(xì)胞進(jìn)行ATTO 550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果,，顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率,。
• 單次電穿孔可實(shí)現(xiàn)高效的多重基因編輯，簡(jiǎn)化了流程,。
上圖：分別電穿孔1種、2種,、6種CRISPR RNPs后96小時(shí),，使用Synthego®多向?qū)Щ蚯贸噭┖羞M(jìn)行的流式細(xì)胞儀分析。
• 提高了轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性,，減少了角化細(xì)胞工程時(shí)間,，提高了成功率。
• 展示了MaxCyte電穿孔過程的可擴(kuò)展性,，可工程化數(shù)百萬原代角化細(xì)胞,，不損失效果。
MaxCyte電穿孔技術(shù)使原代角化細(xì)胞基因組工程更快,，風(fēng)險(xiǎn)更低,。
全文結(jié)論
(1) MaxCyte ATx®平臺(tái)提供了一種高效、符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的多重轉(zhuǎn)染方法,，用于開發(fā)和生產(chǎn)工程化角化細(xì)胞治療產(chǎn)品。
(2) 電穿孔技術(shù)保持了原代新生兒和成年角化細(xì)胞的高活性,、正常形態(tài)和低氧化應(yīng)激,。
(3) 該技術(shù)允許多達(dá)6個(gè)CRISPR RNPs的傳遞，經(jīng)過多輪轉(zhuǎn)染,，效率不降低,。
(4) 平臺(tái)的靈活性允許快速開發(fā)特定亞群的角化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的自體和同種異體細(xì)胞治療流程。
(* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號(hào),，作者：宇文數(shù)學(xué),，已獲得作者授權(quán))
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