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1. 前期準(zhǔn)備

- 實驗材料：獲取神經(jīng)干細(xì)胞（如從胚胎腦組織分離）,、微重力模擬裝置、神經(jīng)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基（含 B27 添加劑,、EGF,、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基）、多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)容器、無菌器械等,。

- 設(shè)備準(zhǔn)備：與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)類似,，調(diào)試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，確保溫度,、氣體環(huán)境適宜,。

2. 細(xì)胞分離與接種

- 細(xì)胞分離：解剖獲取胚胎腦組織，在無菌條件下剪碎,，用胰蛋白酶消化后,，通過機械吹打制成單細(xì)胞懸液，過濾去除組織塊,，離心收集細(xì)胞,。

- 接種：將神經(jīng)干細(xì)胞以 2 - 3×10? 個/mL 的密度接種到微重力培養(yǎng)裝置中，因神經(jīng)干細(xì)胞易貼壁,，包被多聚賴氨酸可促進貼壁。

3. 培養(yǎng)過程

- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yǎng)基,，維持營養(yǎng)成分,。觀察細(xì)胞神經(jīng)球形成情況，神經(jīng)球直徑達到一定大小時,，可進行傳代培養(yǎng),。

- 采用免疫熒光技術(shù)檢測神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物（如 Nestin）的表達，以鑒定細(xì)胞特性,。

4. 誘導(dǎo)分化：培養(yǎng)一定時間后,，可更換為含血清的分化培養(yǎng)基，在微重力環(huán)境下誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元,、星形膠質(zhì)細(xì)胞等分化,，通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測相應(yīng)細(xì)胞標(biāo)志物（如 β - Tubulin III 用于神經(jīng)元，GFAP 用于星形膠質(zhì)細(xì)胞）評估分化效果,。