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蛋白純化注意事項

閱讀:1939      發(fā)布時間:2021-6-16
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1.  選擇表達載體時,,要根據(jù)所表達蛋白的最終應用考慮,。如為方便純化,可選擇融合表達,;如為獲得天然蛋白,,可選擇非融合表達。
 
2.  融合表達時在選擇外源DNA同載體分子連接反應時,,對轉錄和轉譯過程中密碼結構的閱讀不能發(fā)生干擾,。

3.  菌液OD值要小于1,否則細胞太濃太老,,不易破碎,,且質粒易丟失。

4.  誘導時間最好做一個梯度,,不同蛋白誘導時間需摸索,。

5.  誘導溫度適當摸索:25,、30℃。

6.  IPTG濃度:一般在1 mM 以內,,可適當摸索,。

7.  超聲條件可視實際情況改變,只要使菌體裂解充分即可,,即菌液清亮不粘稠,。

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