本文由馬爾文帕納科醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用專家供稿

慢病毒載體（Lentiviral vector, LV）是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),，可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,，從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果,?？捎行У馗腥旧窠?jīng)元細(xì)胞,、肝細(xì)胞,、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞,、內(nèi)皮細(xì)胞,、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因治療效果,。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞,、不分化的細(xì)胞等,，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加,，能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達(dá),。

所以,，在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中慢病毒載體（LV）與腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）同為主流的病毒載體系統(tǒng)。其顆粒粒徑約為90-120nm,。

在慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝中,，有無團(tuán)聚體 （aggregate），以及載體滴度（titer）的高低是重點(diǎn)考察的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）,。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征,，快速實(shí)現(xiàn)CQAs的測量。

Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀

使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿（ZEN2112）進(jìn)行相應(yīng)的粒徑和滴度測定,。樣品測試體積為20µL,，LV折射率、吸收率分別設(shè)置為1.45和0.001,。

通過多角度動態(tài)光散射（multi-angle DLS, MADLS）技術(shù),，我們對LV粒度大小及分布進(jìn)行表征（圖1） ,。圖中有兩個(gè)粒徑分布峰，分別位于106.4以及430.6nm,，這說明體系中除了LV單體,，還有團(tuán)聚體產(chǎn)生。

圖1 LV樣品的光強(qiáng)粒徑分布圖

圖2 LV樣品的載體滴度

此外,，除了基于MADLS技術(shù)得到的顆粒的準(zhǔn)確粒徑分布圖,，我們還得到對應(yīng)尺寸的載體滴度信息（圖2）?？梢钥吹絃V單體的顆粒濃度約1x10¹²個(gè)顆粒/mL,，團(tuán)聚體顆粒濃度約為1x10¹⁰個(gè)顆粒/mL，僅為單體的1%,。單體和聚集體濃度相差較大的情況下,，Zetasizer仍可很好的區(qū)分單體和聚集體。

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