質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,，該酶可以特異性切除賴氨酸基團(tuán)C末端的多肽,，可用于蛋白測(cè)序分析和Lys-X化合物的酶合成,。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸 基團(tuán)的多肽,，增加多肽的數(shù)量,。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品,。

質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶

 

　　本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,，該酶可以特異性切除賴氨酸基團(tuán)C末端的多肽，可用于蛋白測(cè)序分析和Lys-X化合物的酶合成,。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶和胰酶,，可更好地切斷賴氨酸 基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量,。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝,，是方便使用的冷凍干燥品。

 

來(lái)源：細(xì)菌

外觀：凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液,，pH8）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000(瓊脂糖過(guò)濾),，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或緩沖液

穩(wěn)定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中，可在4℃穩(wěn)定保存2年,；在pH值6.0-11.0 30℃時(shí)能穩(wěn)定保存,，但溫度超過(guò)50℃時(shí)不穩(wěn)定,。

適pH值：9.0~9.5

等電點(diǎn)：6.9~7.0 

底物特異性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH₂,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制劑：DFP，PMSF,，TLCK

 

◆特點(diǎn)

● 高特異性,、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析

● 提高裂解效率,、增加肽段數(shù)量

● 根據(jù)使用量特意制備小包裝,，方便使用

 

◆應(yīng)用

 

　　分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)酶切的效果比較,。

　　牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過(guò)SDS-PAGE 獲得,，然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進(jìn)行酶切,，再用MALDI-TOFMS法進(jìn)行分析,。

　　這些蛋白酶的實(shí)驗(yàn)效果見(jiàn)下表。

 

表 1：Tp,、Lys-C和Lys-C+Tp的結(jié)果對(duì)照

這些結(jié)果表明Lys-C酶解的錯(cuò)誤裂解率低,。Tp酶解時(shí)加入Lys-C后，錯(cuò)誤裂解率有所降低,，同時(shí),，可以鑒定出更多的多肽。

 

	Tp	Lys-C	Lys-C+Tp
裂解位點(diǎn)	精氨酸和賴氨酸的C端	賴氨酸的C端	精氨酸和賴氨酸的C端
錯(cuò)誤裂解率 (  錯(cuò)誤裂解所占比例  )	多(8%)	很少(0%)	少(3%)
鑒定出的多肽數(shù)量	17	19	22

 

 

胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D,。

Lys-C+Tp酶切后,，可以在m/z=2000時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒(méi)有吸收峰,。該結(jié)果表明Lys-C可以提高測(cè)序覆蓋度,。

( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

 

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶

　　

賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，初由Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到,。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和Lys-X 化合物的酶催化合成,。該酶穩(wěn)定性高,，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性,。

 

外觀	凍干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer,，pH 8）	活性	見(jiàn)包裝
分子量	27,000（凝膠過(guò)濾）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或緩沖液
pH	9.0-9.5（酰胺酶的活性pH）	等電點(diǎn)	6.9-7.0
抑制劑	DFP,、PMSF,、TLCK	來(lái)源	細(xì)菌
穩(wěn)定性	溶于pH 值5.0-12.0 的緩沖液中，可于4℃穩(wěn)定保存,。溶于pH值6.0-11.0的緩沖液中,，可于30℃穩(wěn) 　定保存,，但是50℃及以上不穩(wěn)定。
單位定義	一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生1 μmol對(duì)硝基苯胺所需的酶量,。
底物特異性	水解底物：Tos-Lys-Ome,、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA,、Lys-pNA
	非水解底物：Bz-Arg-NH2,、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品等級(jí)
125-05061	賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶,，MS級(jí)	20 μg×5	質(zhì)譜級(jí)

 

質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶