化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
骨髓基質(zhì)細胞固紫B鹽染色法
閱讀：692 發(fā)布時間：2019-11-12
有研究表明,，骨髓基質(zhì)細胞（BMSC）在調(diào)控造血,、組織修復(fù)及一些疑難疾病的治療中具有重要意義。然而BMSC并不具備典型形態(tài)特征,，且骨髓涂片中數(shù)量甚少,，傳統(tǒng)的wright-Giemsa法染色后于普通光鏡下不易識別。應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)結(jié)合流式細胞儀,、免疫細胞化學(xué)染色,、熒光標(biāo)記技術(shù)等可將其鑒別，但亦各有其局限性,。
為此,，龔旭波等人[1]建立了將固紫B鹽應(yīng)用于BMSC的特異性細胞化學(xué)染色方法,。該方法簡便快速，整個操作過程僅需30 min,，染色明顯,，對陳舊標(biāo)本也易著色，染色液配置后可較長時間保存,，染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色,，表明固紫B鹽對BMSC染色具有較高的穩(wěn)定性、特異性,。
◆實驗步驟
1．標(biāo)本采集
吸取患者骨髓,、胸腔積液或腹腔積液50 μL制成涂片。
2．溶液配制
固定液：95％乙醇溶液34.5 mL,，40％甲醛溶液5.5 mL,，蒸餾水1 mL混合而成；
1 g/L固紫B鹽PBS溶液：50 mg固紫B鹽粉末溶于50 mL PBS溶液,，pH 7.2~7.6,，4℃下保存；
蘇木精復(fù)染液：蘇木精2 g溶于250 mL無水乙醇中,，硫酸鋁10 g溶于750 mL蒸餾水中,，兩種溶液混合后加熱煮沸2 min，再加入0.5 g碘酸鈉和1 g檸檬酸,，混勻,。
3．固紫B鹽染色
上述新鮮干燥標(biāo)本于固定液固定30 s，小水流沖洗后晾干,，置入1 g/L固紫B鹽PBS溶液（pH 7.2~7.6）,，37℃水浴箱內(nèi)置30 min，流水沖洗1 min,，晾干后蘇木精復(fù)染2 min,，流水沖洗，待干,。鏡下觀察細胞的著色·情況及陽性BMSC形態(tài)特征,。
◆染色效果
圖a~d: 骨髓涂片
a~d圖箭頭所示為骨髓基質(zhì)細胞胞質(zhì)染為紫紅色，胞核不著色,，而其他細胞均無此染色特征（固紫B鹽染色x1000）
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
060-01081 | Fast Violet B Salt | Wako Special Grade | 1.5 g |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
052-07221 | Ethanol(99.5) | for Molecular Biology | 100 mL |
166-23555 | PBS(-) | for Cell Culture | 500 mL |
088-07461 | Hematoxylin Monohydrate | for Cell Staining | 5 g |
018-09745 | Aluminium Sulfate | Practical Grade | 500 g |
190-02252 | Sodium Iodate | Wako Special Grade | 25 g |
036-05522 | Citric Acid | Wako Special Grade | 25 g |
◆參考文獻
[1]龔旭波, 吳先國, 盧興國, 等. 骨髓基質(zhì)細胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2008,31(8):890-893.