液相色譜儀只需要將樣品制成溶液,，不受樣品揮發(fā)性的影響。流動相選擇范圍廣,，固定相數(shù)量多,，可以分離出熱不穩(wěn)定、不揮發(fā),、不離解,、分子量范圍多樣的材料,。
在LC液相色譜分析檢測樣品過程中，色譜柱會受到樣品和色譜系統(tǒng)的污染,，導(dǎo)致色譜柱耐久性差,，使用壽命短。
色譜系統(tǒng)污染主要是指LC液相色譜系統(tǒng)中組分磨損產(chǎn)生的固體顆粒,，以及流動相系統(tǒng)沒有*過濾的固體顆粒,。樣品污染主要是指未*溶解或已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)。由于樣品溶劑和流動相溶劑的溶解度不同,，被污染的體系被析出,。特別是對中藥、天然產(chǎn)物,、合成中間體和生物藥物的檢測,，由于基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱的污染將更加嚴(yán)重,。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高,、色譜柱塌陷、填料變色,，從而帶來檢測成本高,、檢測結(jié)果不準(zhǔn)確等影響。
液相色譜法的發(fā)展是一個復(fù)雜的過程,，但無論多么復(fù)雜,，也有自己的規(guī)律。在方法開發(fā)過程中,，一般的原則是找到目標(biāo)化合物的峰,，然后調(diào)整峰形，再進(jìn)一步改進(jìn),。
光譜上的內(nèi)容主要包括：色譜柱,、波長、流動相,、溫度,、流速和注射量。這意味著如果確定了這些色譜條件,，基本上可以認(rèn)為該方法已經(jīng)開發(fā)成功,，所以我們可以通過對這些色譜條件進(jìn)行逐一檢查來開發(fā)該方法。
色譜條件的檢驗是通過色譜中的樣品來進(jìn)行的,，這就要求我們首先建立一個初始條件,，即回答從哪里開始的問題。在回答“從哪里開始”這個問題之前,，我們需要了解我們的分析對象,，就像一場戰(zhàn)爭,，我們需要知道我們的敵人是誰，我們需要了解它的物理和化學(xué)性質(zhì),，尤其是化學(xué)結(jié)構(gòu)公式是非常關(guān)鍵的,。
液相色譜儀與樣品預(yù)處理技術(shù)相結(jié)合，具有較高的分辨率和靈敏度,，使分離和同時測定性質(zhì)非常相似的物質(zhì)成為可能，并可在復(fù)雜相中分離痕量成分,。隨著固定相的發(fā)展,，有可能在足夠的條件下分離生物化學(xué)物質(zhì)以保持其活性。
為液相色譜儀的注射口和檢測器類型選擇柱尺寸和墊片材料,；避免重復(fù)使用氣相色譜儀墊圈,；使用合適的刀具（如陶瓷板或金剛石刀）切割立柱；安裝進(jìn)氣口和檢測器前,，確保氣相色譜柱清潔平整,。應(yīng)制造商要求安裝氣相色譜儀，并在進(jìn)氣口與檢測器之間的適當(dāng)距離插入色譜柱,；氣柱必須置于柱上,，毛細(xì)管柱的任何部分不得接觸柱壁。確保烘箱內(nèi)所有接頭在加熱前是水密的,，載氣中無氧,；通過注射檢查LC柱安裝是否正確，不要保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序,，并設(shè)置載氣線性流量,。
液相色譜儀要求
1、 使用前,，流動相必須用液相色譜級試劑進(jìn)行過濾,，去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)（過濾膜為0、45m或更細(xì)）,。
2,、 流動相過濾后采用超聲波除氣。脫氣后在室溫下使用,。
3,、純乙腈不能作為流動相，會導(dǎo)致單向閥卡住,，阻止泵進(jìn)入液體,。
4、 使用緩沖液時,，樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時,，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上,，使離子*去除。對于柱塞棒的外部,，樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗,。
5、 不要長時間使用這個儀器,。拆下立柱,，用插頭密封。注意,，由于長霉,，鋼瓶不應(yīng)存放在純水中，而應(yīng)存放在有機相中（如甲醇等）,。
6,、 用液相色譜法測定樣品后，用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器,。
7,、 C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品,。
8,、 如因堵塞造成壓力過高，可在混合器管道的過濾器單向閥內(nèi)使用預(yù)柱式過濾器進(jìn)行檢查和清洗,。清洗方法：
9,、 氣泡會造成不穩(wěn)定的壓力和較差的重現(xiàn)性，所以在使用過程中盡量避免氣泡,。
10,、 液相色譜儀如果液管中沒有液體，LC液相色譜儀應(yīng)使用注射器吸液：注射前應(yīng)清洗流動相,。
11,、 注意色譜柱的pH值范圍。不要注入強酸或堿性樣品,，特別是堿性樣品,。
12、 更換移動相時,，濾頭應(yīng)放置在燒杯內(nèi),，振動時清洗干凈，再插入新的移動相,。不混相流動轉(zhuǎn)化為異丙醇,。
液相色譜系統(tǒng)由儲液器、泵、采樣器,、色譜柱,、檢測器和記錄儀組成。流動相的蓄電池是高壓泵入系統(tǒng),，樣品溶液為流動相,，取樣器是流動相在色譜柱（固定相），因為各種組件的示例解決方案兩個階段有不同的分配系數(shù),，相對運動的兩個階段,，經(jīng)過幾次的吸附-解吸過程，組件在移動速度的分布有很大的差異,，將逸出的成分從柱中分離出來,，通過檢測器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號發(fā)送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來。
液相色譜儀的工作原理是流動相累加器是高壓泵入系統(tǒng),，樣品溶液為流動相,，取樣器是流動相在色譜柱（固定相），因為各種組件的示例解決方案兩個階段有不同的分配系數(shù),，相對運動的兩個階段,，經(jīng)過幾次的吸附-解吸過程中，各組分的分布在運動速度上有很大差別,，逸出的組分在色譜柱中分離,，通過檢測器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號發(fā)送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來,。
LC液相色譜儀不適合溫度環(huán)境。正常情況下,，在5 ~ 35℃的室溫下即可滿足使用要求,。一般來說，濕度環(huán)境需要在20%到85%之間,。在高濕度地區(qū),，使用某些類型的氣相色譜儀時，由于環(huán)境濕度高,，會降低氣相色譜儀的絕緣性能,，工作靈敏度高時響應(yīng)值也會降低。員工在使用氣相色譜儀時,，遇到上述現(xiàn)象應(yīng)采取必要的措施,。只需要將樣品制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的影響。流動相選擇范圍廣,，固定相數(shù)量多,，可以分離出熱不穩(wěn)定、不揮發(fā),、不離解,、分子量范圍多樣的材料。
在LC液相色譜分析檢測樣品過程中,，色譜柱會受到樣品和色譜系統(tǒng)的污染,，導(dǎo)致色譜柱耐久性差，使用壽命短,。
色譜系統(tǒng)污染主要是指LC液相色譜系統(tǒng)中組分磨損產(chǎn)生的固體顆粒,，以及流動相系統(tǒng)沒有*過濾的固體顆粒。樣品污染主要是指未*溶解或已*溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng),。由于樣品溶劑和流動相溶劑的溶解度不同,，被污染的體系被析出。特別是對中藥,、天然產(chǎn)物,、合成中間體和生物藥物的檢測，由于基質(zhì)的復(fù)雜性,，色譜柱的污染將更加嚴(yán)重,。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷,、填料變色,，從而帶來檢測成本高、檢測結(jié)果不準(zhǔn)確等影響,。
液相色譜儀的發(fā)展是一個復(fù)雜的過程,，但無論多么復(fù)雜，也有自己的規(guī)律,。在方法開發(fā)過程中,，一般的原則是找到目標(biāo)化合物的峰，然后調(diào)整峰形,，再進(jìn)一步改進(jìn),。
光譜上的內(nèi)容主要包括：色譜柱、波長,、流動相,、溫度、流速和注射量,。這意味著如果確定了這些色譜條件,，基本上可以認(rèn)為該方法已經(jīng)開發(fā)成功，所以我們可以通過對這些色譜條件進(jìn)行逐一檢查來開發(fā)該方法。
色譜條件的檢驗是通過色譜中的樣品來進(jìn)行的,，這就要求我們首先建立一個初始條件,，即回答從哪里開始的問題。在回答“從哪里開始”這個問題之前,，我們需要了解我們的分析對象,，就像一場戰(zhàn)爭，我們需要知道我們的敵人是誰,，我們需要了解它的物理和化學(xué)性質(zhì),，尤其是化學(xué)結(jié)構(gòu)公式是非常關(guān)鍵的。
液相色譜與樣品預(yù)處理技術(shù)相結(jié)合,，具有較高的分辨率和靈敏度,，使分離和同時測定性質(zhì)非常相似的物質(zhì)成為可能，并可在復(fù)雜相中分離痕量成分,。隨著固定相的發(fā)展,，有可能在足夠的條件下分離生物化學(xué)物質(zhì)以保持其活性。
為液相色譜儀的注射口和檢測器類型選擇柱尺寸和墊片材料,；避免重復(fù)使用氣相色譜儀墊圈,；使用合適的刀具（如陶瓷板或金剛石刀）切割立柱；安裝進(jìn)氣口和檢測器前,，確保氣相色譜柱清潔平整。應(yīng)制造商要求安裝氣相色譜儀,，并在進(jìn)氣口與檢測器之間的適當(dāng)距離插入色譜柱,；氣柱必須置于柱上，毛細(xì)管柱的任何部分不得接觸柱壁,。確保烘箱內(nèi)所有接頭在加熱前是水密的,，載氣中無氧；通過注射檢查LC柱安裝是否正確,，不要保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序,，并設(shè)置載氣線性流量。
液相色譜儀要求
1,、 使用前,，流動相必須用液相色譜級試劑進(jìn)行過濾，去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)（過濾膜為0,、45m或更細(xì)）,。
2、 流動相過濾后采用超聲波除氣,。脫氣后在室溫下使用,。
3、純乙腈不能作為流動相，會導(dǎo)致單向閥卡住,，阻止泵進(jìn)入液體,。
4、 使用緩沖液時,，樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時,，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，使離子*去除,。對于柱塞棒的外部,，樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。
5,、 不要長時間使用這個儀器,。拆下立柱，用插頭密封,。注意,，由于長霉，鋼瓶不應(yīng)存放在純水中,，而應(yīng)存放在有機相中（如甲醇等）,。
6、 用液相色譜法測定樣品后,，用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器,。
7、 C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品,、血液樣品和生物樣品,。
8、 如因堵塞造成壓力過高,，可在混合器管道的過濾器單向閥內(nèi)使用預(yù)柱式過濾器進(jìn)行檢查和清洗,。清洗方法：
9、 氣泡會造成不穩(wěn)定的壓力和較差的重現(xiàn)性,，所以在使用過程中盡量避免氣泡,。
10、 如果液管中沒有液體,，液相色譜儀應(yīng)使用注射器吸液：注射前應(yīng)清洗流動相,。
11、 注意色譜柱的pH值范圍,。不要注入強酸或堿性樣品,，特別是堿性樣品。
12,、 更換移動相時,，濾頭應(yīng)放置在燒杯內(nèi),，振動時清洗干凈，再插入新的移動相,。不混相流動轉(zhuǎn)化為異丙醇,。
液相色譜系統(tǒng)由儲液器、泵,、采樣器,、色譜柱、檢測器和記錄儀組成,。流動相的蓄電池是高壓泵入系統(tǒng),，樣品溶液為流動相，取樣器是流動相在色譜柱（固定相）,，因為各種組件的示例解決方案兩個階段有不同的分配系數(shù),，相對運動的兩個階段，經(jīng)過幾次的吸附-解吸過程,，組件在移動速度的分布有很大的差異,，將逸出的成分從柱中分離出來，通過檢測器,，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號發(fā)送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來。
液相色譜儀的工作原理是流動相累加器是高壓泵入系統(tǒng),，樣品溶液為流動相,，取樣器是流動相在色譜柱（固定相），因為各種組件的示例解決方案兩個階段有不同的分配系數(shù),，相對運動的兩個階段,，經(jīng)過幾次的吸附-解吸過程中，各組分的分布在運動速度上有很大差別,，逸出的組分在色譜柱中分離，通過檢測器,，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號發(fā)送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來。
液相色譜儀不適合溫度環(huán)境,。正常情況下,，在5 ~ 35℃的室溫下即可滿足使用要求。一般來說,，濕度環(huán)境需要在20%到85%之間,。在高濕度地區(qū)，使用某些類型的氣相色譜儀時,，由于環(huán)境濕度高,，會降低氣相色譜儀的絕緣性能,，工作靈敏度高時響應(yīng)值也會降低。員工在使用氣相色譜儀時,，遇到上述現(xiàn)象應(yīng)采取必要的措施,。
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