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掃描電鏡樣品的處理過(guò)程介紹
閱讀：6092 發(fā)布時(shí)間：2021-4-16
掃描電鏡(SEM)是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段,，可直接利用樣品表面材料的物質(zhì)性能進(jìn)行微觀成像,。掃描電鏡的結(jié)構(gòu)包括電子光學(xué)系統(tǒng),、圖像顯示和記錄系統(tǒng),、真空系統(tǒng),、X射線能譜分析系統(tǒng),。其基本原理是用極細(xì)的電子束在樣品表面上掃描,，然后按電視原理放大成像,，顯示在電視屏幕上。
掃描電鏡樣品的處理過(guò)程：
主要包括表面清潔,、固定,、漂洗和脫水等過(guò)程，基本上與透射電鏡樣品的處理方法相似,但也有其特殊之處,。
1. 樣品大小 所切取樣品比透射電鏡樣品稍大一些,，為8～10mm2，高約5mm,。
2. 清潔表面 清潔表面并充分暴露樣品表面,。常用清洗液有蒸餾水、生理鹽水,、緩沖液及含酶的清洗液等,。
3. 固定和脫水 常用的固定方法是戊二醛-四氧化餓雙重固定，也可用戊二醛單固定法。
常用脫水劑是乙醇或丙酮,。脫水劑濃度梯度增加,，從30%或50%開(kāi)始至100%進(jìn)行脫水；易變形樣品脫水劑濃度梯度宜緩慢遞增,。
4. 樣品的干燥 脫水后,，需要將樣品中的脫水劑*揮發(fā)干凈，即樣品干燥,。其方法有：空氣干燥 ,、真空干燥、冷凍干燥和臨界點(diǎn)干燥,。
5. 樣品表面導(dǎo)電處理 用金屬鍍膜法和組織導(dǎo)電處理技術(shù),，一是可增強(qiáng)導(dǎo)電能力，消除荷電效應(yīng),；二是增加樣品表面二次電子發(fā)射率,，加強(qiáng)訊號(hào)，提高圖像反差,。
（1）金屬鍍膜：使樣品表面覆蓋薄層金屬膜,，這層薄膜與樣品表面的凹凸形態(tài)*一致，使標(biāo)本表面的形貌得以反映,。常用的金屬有金,、鉑、鉬,、或金/鉑,、鉑/銫合金。鍍膜的方法有真空鍍膜法和離子濺射法,。
（2）組織導(dǎo)電技術(shù)：其目的是為提高導(dǎo)電率克服生物材料的荷電效應(yīng),，提高樣品表面二次電子發(fā)射率。組織導(dǎo)電處理也稱導(dǎo)電染色,，是利用某些金屬鹽類能與生物材料中的蛋白質(zhì),、脂類和淀粉等結(jié)合，使樣品表面離子化,，使組織導(dǎo)電性增加,；并且提高二次電子的發(fā)射率?？捎么姿徕?、碘化鉀、丹寧酸等處理標(biāo)本,。