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上海拓紛機(jī)械設(shè)備有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 復(fù)合材料凍干機(jī),新材料凍干機(jī),乳制品凍干機(jī),生物制劑凍干機(jī) |
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2016-10-12 閱讀(1608)
抗凍蛋白zui早在南極魚(yú)類中發(fā)現(xiàn),，是一類能夠抑制冰晶生長(zhǎng)的特殊蛋白.由于抗凍蛋白分布的不普遍性，很難從特定幾種植物中找到，并且傳統(tǒng)的質(zhì)外體提取技術(shù)難掌握,。
先將液氮保存的高山冰緣植物葉片高山紅景天,、高山早熟禾,、高山離子芥,、株芽蓼利用液氮進(jìn)行研磨，研磨得到的粉末用PH8.0磷酸緩沖液混勻,，并12000g離心10分鐘,，取上清，此為可溶性蛋白粗提液,，將45毫升粗提液放入50毫升小燒杯5在層析冷柜低溫4℃保存待用,。用高壓氮?dú)馔ㄟ^(guò)減壓閥門2以0.1兆帕壓力順導(dǎo)管3流經(jīng)液氮進(jìn)行探頭預(yù)冷，探頭浸入含蛋白粗提液的50毫升小燒杯5進(jìn)行凍冰吸附,，內(nèi)放轉(zhuǎn)子進(jìn)行磁力攪拌保持溶液均勻,。
當(dāng)燒杯內(nèi)液面下降5毫升后取出凍冰探頭7，室溫融化冰晶,，補(bǔ)加磷酸緩沖液至45毫升,，重復(fù)用探頭凍冰吸附一次。第二次凍冰的冰晶室溫融化,，利用截流量5000道爾頓的透析袋在無(wú)離子水中脫鹽12小時(shí),，每隔2小時(shí)換水，脫鹽后透析袋埋入PEG8000的粉末中濃縮,。濃縮后的蛋白溶液用用考馬斯亮藍(lán)G250比色法測(cè)定濃度,，用BSA做標(biāo)準(zhǔn)曲線。將定量后的蛋白用20％蔗糖溶液稀釋成1mg/L和5mg/L濃度,，滴加到一載玻片,，覆蓋一蓋玻片壓成均勻液膜,。將制片放入上海拓紛-70℃超低溫冰箱?內(nèi)30分鐘凍冰后，通過(guò)塑料泡沫板13操作入口迅速將制片11放到顯微鏡9載物臺(tái),，通過(guò)照相目鏡子10操作觀察口觀察中向蓋玻片上加一滴二甲苯,，100倍油鏡觀察，調(diào)整視野,，重結(jié)晶15分鐘后放上照相機(jī)照相記錄,，發(fā)現(xiàn)高山離子芥和株芽蓼具有抑制重結(jié)晶的活性.
文章編輯:上海拓紛機(jī)械設(shè)備有限公司（搜索我司名,，即可找到我們）
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