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上海拓紛機械設備有限公司
主營產品： 復合材料凍干機,新材料凍干機,乳制品凍干機,生物制劑凍干機 |
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2016-10-12 閱讀(1713)
抗凍蛋白zui早在南極魚類中發(fā)現,，是一類能夠抑制冰晶生長的特殊蛋白.由于抗凍蛋白分布的不普遍性,，很難從特定幾種植物中找到,，并且傳統的質外體提取技術難掌握,。
先將液氮保存的高山冰緣植物葉片高山紅景天,、高山早熟禾,、高山離子芥,、株芽蓼利用液氮進行研磨,，研磨得到的粉末用PH8.0磷酸緩沖液混勻，并12000g離心10分鐘,，取上清,，此為可溶性蛋白粗提液，將45毫升粗提液放入50毫升小燒杯5在層析冷柜低溫4℃保存待用,。用高壓氮氣通過減壓閥門2以0.1兆帕壓力順導管3流經液氮進行探頭預冷,，探頭浸入含蛋白粗提液的50毫升小燒杯5進行凍冰吸附，內放轉子進行磁力攪拌保持溶液均勻,。
當燒杯內液面下降5毫升后取出凍冰探頭7,，室溫融化冰晶，補加磷酸緩沖液至45毫升,，重復用探頭凍冰吸附一次,。第二次凍冰的冰晶室溫融化，利用截流量5000道爾頓的透析袋在無離子水中脫鹽12小時,，每隔2小時換水,，脫鹽后透析袋埋入PEG8000的粉末中濃縮。濃縮后的蛋白溶液用用考馬斯亮藍G250比色法測定濃度,，用BSA做標準曲線,。將定量后的蛋白用20％蔗糖溶液稀釋成1mg/L和5mg/L濃度,，滴加到一載玻片,，覆蓋一蓋玻片壓成均勻液膜。將制片放入上海拓紛-70℃超低溫冰箱?內30分鐘凍冰后,，通過塑料泡沫板13操作入口迅速將制片11放到顯微鏡9載物臺,，通過照相目鏡子10操作觀察口觀察中向蓋玻片上加一滴二甲苯，100倍油鏡觀察,，調整視野,，重結晶15分鐘后放上照相機照相記錄，發(fā)現高山離子芥和株芽蓼具有抑制重結晶的活性.
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