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大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用

試驗原理：

FⅫ試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知FⅫ濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將FⅫ和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中FⅫ的活性濃度呈比例關(guān)系,。

大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水,。

2．  加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200,、500ul,、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)檢測試劑盒操作注意事項

1．  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存,。

2．  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。

3．  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6．  洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。

7．  底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

8．  加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

9．  按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法

1,、  血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2,、  血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3,、  細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4,、  保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)檢測試劑盒試劑的準(zhǔn)備

1．  標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,，不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟

1．  使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

3．  加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。

4．  甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。

7．  每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。

8．  取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值,。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

4.局限性：6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1,、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的FⅫ標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線,，樣品的FⅫ含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3,、檢測值范圍：0-400ng/ml

xyA228Ra 【中文名稱】：大鼠抗繆勒管激素(AMH)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Anti-Mullerian Hormone (AMH) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA685Ra 【中文名稱】：大鼠CD14分子(CD14)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 14 (CD14) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA680Ra 【中文名稱】：大鼠棕櫚?；さ鞍?(MPP2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Membrane Protein, Palmitoylated 2 (MPP2) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA681Ra 【中文名稱】：大鼠乙醇脫氫酶1(ADH1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Alcohol DehydrogenaHZ 1 (ADH1) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB406Ra 【中文名稱】：大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB472Ra 【中文名稱】：大鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Alkaline PhosphataHZ (ALP) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB064Ra 【中文名稱】：大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Apoptosis Inducing Factor (AIF) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA273Ra 【中文名稱】：大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Inhibin Binding Protein (INHBP) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA260Ra 【中文名稱】：大鼠β2-微球蛋白(β2M)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Beta-2-Microglobulin (b2M) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB656Ra 【中文名稱】：大鼠三葉因子3(TFF3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Trefoil Factor 3, Intestinal (TFF3) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB119Ra 【中文名稱】：大鼠金屬硫蛋白1(MT1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Metallothionein 1 (MT1) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB657Ra 【中文名稱】：大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Carnitine Acylcarnitine TranslocaHZ (CACT) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB370Ra 【中文名稱】：大鼠乳酸脫氫酶A(LDHA)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Lactate DehydrogenaHZ A (LDHA) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB671Ra 【中文名稱】：大鼠AMP激活蛋白激酶β1(PRKAβ1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Protein KinaHZ, AMP Activated Beta 1 (PRKAb1) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB672Ra 【中文名稱】：大鼠促性腺激素釋放激素受體(GnRHR)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Gonadotropin Releasing Hormone ReHZptor (GnRHR) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB685Ra 【中文名稱】：大鼠整合素αM(ITGαM)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Integrin Alpha M (ITGaM) 【靈敏度】：9.375pg/mL