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人去甲腎上腺素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書用于人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人去甲腎上腺素酶聯(lián)含量,。價格公道,，現(xiàn)貨供應(yīng),。

人去甲腎上腺素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供體外研究使用

產(chǎn)品編號：HY1002

預(yù)期應(yīng)用

ELISA法定量測定人血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中去甲腎上腺素含量。

人去甲腎上腺素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗去甲腎上腺素抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗去甲腎上腺素抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的去甲腎上腺素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，計算樣品濃度,。

試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 pg/ml,，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋

200 pg/ml，100 pg/ml,，50 pg/ml,，25 pg/ml，12.5 pg/ml,，6.25 pg/ml,，3.12 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制,。

如配制100 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）200 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可，其余濃度以此類推,。

3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶,。

4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。

5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶,。

6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml,。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制,。

7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋,。稀釋方法同檢測溶液A,。

8. 底物溶液：1×10ml/瓶,。

9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。

10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）,。

標(biāo)本的采集及保存

1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,，-20℃不應(yīng)超過3個月,，-80℃不應(yīng)超過6個月；標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測,；高血脂的標(biāo)本不需進(jìn)行特殊處理，可直接檢測。

操作步驟

實驗開始前,，請?zhí)崆芭渲坪盟性噭?；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,，均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實驗室在操作前先進(jìn)行預(yù)實驗以建立*稀釋倍數(shù),。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。

為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（在使用前一小時內(nèi)配制）,，37℃,60分鐘,。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，350ul/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul,，37℃,，60分鐘,。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘,，350ul/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90ul,，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）,。

7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng),，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測,。

注：

1. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔（不同于空白孔）,，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2N H₂SO4,。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

2. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,。使用后立即冷藏保存試劑。

3. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入檢測溶液B或底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，避免酶標(biāo)板長時間處于干燥狀態(tài),。

4. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值,。

5. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。

6. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,，請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，請精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10ul），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；檢測液A,、B，以及底物溶液在使用前,，應(yīng)置于37℃溫育30分鐘,；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。

7. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水

紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需

要，重復(fù)此過程數(shù)次,。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性

本試劑盒可同時檢測重組或天然的人去甲腎上腺素,，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng),。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)）,，在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,，如curve expert 1.3），根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1. 洗滌過程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽性,。

2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣,。

3. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。

4. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù),。

5. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。

6. 底物請避光保存。

檢測范圍：3.12 pg/ml - 200 pg/ml

zui低檢測限：0.78 pg/ml

說明

1. 只有全部使用USCNLIFE試劑才能保證檢測效果,，因為所有試劑都是有關(guān)聯(lián)的,，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守USCNLIFE試劑的試驗說明才會得到*的檢測結(jié)果,。

2. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染,，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。

3. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時,，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間,，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。而且,，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果,。

4. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃,，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。

5. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。

6. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。

7. 中,、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準(zhǔn),。

8. 所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

9. 有效期：6個月xy-E10390 【中文名稱】：人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒【英文名稱】：Collagen Ⅱ (HCB Ⅱ) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10391 【中文名稱】：人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human secretin / secretin (Secretin) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10392 【中文名稱】：人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human peptide YY (Peptide-YY) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10393 【中文名稱】：人促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human gastrin receptor (GsaR) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10394 【中文名稱】：人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human cholecystokinin / cholecystokinin octapeptide (CCK-8) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10395 【中文名稱】：人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA 【英文名稱】：Human trypsinogen activation peptide (TAP) ELISA 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10396 【中文名稱】：人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human endothelial nitric oxide synthase 3 (eNOS-3) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10397 【中文名稱】：人丙二醛(MDA)ELISA試劑盒【英文名稱】：People malondialdehyde (MDA) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10398 【中文名稱】：人胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human amylin (Amylin) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10399 【中文名稱】：人血管活性腸肽(VIP)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human vasoactive intestinal peptide (VIP) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10400 【中文名稱】：人膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human cholecystokinin / incretin trypsin peptides (CCK) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10401 【中文名稱】：人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒【英文名稱】：People Ⅲ procollagen peptide (P Ⅲ NP) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10402 【中文名稱】：人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒【英文名稱】：People Ⅱ collagen (Col Ⅱ) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10403 【中文名稱】：人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human collagen type Ⅰ (Col Ⅰ) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10404 【中文名稱】：人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒【英文名稱】：People Ⅰ procollagen carboxy-terminal peptide (P Ⅰ CP) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10405 【中文名稱】：人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒【英文名稱】：Human collagen type Ⅳ (Col Ⅳ) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL

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