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人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA 試劑盒

本試劑僅供研究使用

試驗原理：

α-enolase試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知α-enolase濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將α-enolase和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中α-enolase的活性濃度呈比例關系,。

人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA 試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水,。

2．  加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul、200,、500ul,、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA 試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。

7．  底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

9．  按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集,、處理及保存方法

1,、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2,、  血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4,、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA 試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。

4．  甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

7．  每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。

8．  取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值,。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應,。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

4.局限性：6號標準品以上的結果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。

結果 判 斷 與 分 析

1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的α-enolase標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的α-enolase含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3,、檢測值范圍：0-400ng/ml

xy-E10048 【中文名稱】：人可溶性CD38(sCD38)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human soluble CD38 (sCD38) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10049 【中文名稱】：人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA試劑盒Human soluble CD21 (CR2/sCD21) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10050 【中文名稱】：人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒Human soluble leptin receptor (sLR) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10051 【中文名稱】：人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑Human Toll-like receptor 9 (TLR-9/CD289) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10052 【中文名稱】：人轉化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒Human transforming growth factor β2 (TGFβ2) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10053 【中文名稱】：人單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒Human monocyte chemoattractant protein- 4 (MCP-4/CCL13) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10054 【中文名稱】：人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒People leukotriene D4 (LTD4) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10055 【中文名稱】：人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA試劑盒Human N -cadherin / neural cadherin (N-Cad) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10056 【中文名稱】：人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA試劑Human erythropoietin stimulating factor (ESF) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10057 【中文名稱】：人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子(TRANCE)ELISA試劑盒Human tumor necrosis factor-related activation-induced factor (TRANCE) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10058 【中文名稱】：人生長激素釋放因子(GH-RF)ELISA試劑盒Human growth hormone releasing factor (GH-RF) ELISA Kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10059 【中文名稱】：人巨噬細胞趨化因子(MCF)ELISA試劑Human macrophage chemotactic factor (MCF) ELISA kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10060 【中文名稱】：人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒Human α / β interferon receptor (IFN-α/βR) ELISA Kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10061 【中文名稱】：人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒Human B cell growth factor (BCGF) ELISA Kit  【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10062 【中文名稱】：人B細胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒The human B- cell differentiation factor (BCDF) ELISA Kit  【靈敏度】：9.375pg/mL