| 一,、細(xì)胞基本屬性 |
| 種屬來源 | 人 |
| 組織來源 | 肺癌,；非小細(xì)胞肺癌 |
| 生長特性 | 貼壁生長 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
| 背景介紹 | 該細(xì)胞源于一位51歲患有非小細(xì)胞肺癌黑人男性患者的治療前的腫瘤組織，表達(dá)C-myc,、L-myc,、v-src、v-abl,、v-erb B,、c-raf 1、Ha-ras,、Ki-ras,、N-ras RNAs；該細(xì)胞攜帶K-ras 12突變,；p53基因246位密碼子突變ATC→ATG,；表達(dá)PDGF A和B鏈的異源mRNA；表達(dá)TGFα,、TGFβ和EGFR,；角蛋白 5、8和18陽性,，波形蛋白陽性,，神經(jīng)絲蛋白陰性，左旋多巴脫氫酶陰性,；據(jù)報道,，在軟瓊脂中該細(xì)胞形成克隆的效率為9.7%。 |
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測 | 無 |
| 培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ |
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
| 細(xì)胞貨期 | 1-2周 |
| 運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 |
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后,，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 |
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| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
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| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代
1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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| 傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心4 min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 |
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| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 2.因運輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,；
2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后,，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 |
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| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2.靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照）,，記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。
4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
| 三.細(xì)胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,，液氮儲存 |
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 |
| 凍存方法 | a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),。
b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。
c,、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
| 注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常,，及時調(diào)整實驗方案 |
| 四,、售后服務(wù) |
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開封,，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā),； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后,，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染,，經(jīng)核實后，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實后,，重發(fā)； 7.視具體情況而定,。 |
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,，不重發(fā),； 7.視具體情況而定。 |
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