| 一、細(xì)胞基本屬性 |
| 細(xì)胞名稱(chēng) | A375-eGFP（人惡性黑色素瘤細(xì)胞-綠色熒光蛋白標(biāo)記（STR鑒定正確）） |
| 細(xì)胞別稱(chēng) | A375-eGFP,；人惡性黑色素瘤細(xì)胞-eGFP,；人惡性黑色素瘤細(xì)胞-綠色熒光蛋白標(biāo)記 |
| 種屬來(lái)源 | 人 |
| 組織來(lái)源 | 黑色素瘤 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
| 背景介紹 | A375-eGFP是在 A375細(xì)胞上用慢病毒標(biāo)記上eGFP，可以顯示綠色熒光,，帶有嘌呤霉素抗性,。
A375源自一位54歲女性,，是Giard DJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株,。該細(xì)胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆,。 |
| puro藥篩濃度 | 該細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,，培養(yǎng)過(guò)程中可不用再添加puro，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時(shí)間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
| 生物安全等級(jí) | 1 |
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測(cè) | 無(wú) |
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-1619 ATCC; CRL-7904 BCRC; 60039 BCRJ; 0278 |
| 培養(yǎng)基 | 90% DMEM+10% FBS+PS |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ |
| 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液,，液氮儲(chǔ)存 |
| 細(xì)胞貨期 | 1-2周 |
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 |
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用 |
| 特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主 |
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 |
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| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
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| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代
1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 |
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| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,；
2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后,，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 |
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| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。
2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。
4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。 |
| 三.細(xì)胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液,，液氮儲(chǔ)存 |
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 |
| 凍存方法 | a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。
b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,，若有異常,，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
| 四、售后服務(wù) |
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 7.視具體情況而定。 |
| 不予重發(fā) | 1.客戶(hù)操作造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)； 2.客戶(hù)嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的,，不重發(fā),； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 |
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