Karpas422 (人非霍奇金淋巴瘤)

二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。 

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

a、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

b、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；

c,、棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,，最后放入37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

d,、待細(xì)胞貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。 

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例,；

a,、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

b、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；

c,、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；

d,、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。 

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān),。 

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清,。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。 

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流,。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞 的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿,。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿,。

僅用于科研，不能用于臨床診斷,！所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù),。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn),，網(wǎng)站說明書僅供參考。