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產(chǎn)品型號50次

品牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-08-12 13:56:12瀏覽次數(shù)：547次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0653	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α,、β、γ,、未分類皰疹病毒四個亞科,。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物,。在自然界廣泛存在,，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織,。

詳情介紹

沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

Salmonella spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

沙門氏菌(Salmonella spp.)是沙門氏菌病的病原體，屬腸桿菌科,，革蘭氏陰性腸道桿菌,。沙門氏菌屬有的專對人類致病，有的只對動物致病,，也有對人和動物都致病,。沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生不同形式的總稱,。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品,，可使人發(fā)生食物中毒。據(jù)統(tǒng)計在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中,，沙門氏菌引起的食物中毒常列,，我國內(nèi)陸地區(qū)也以沙門氏菌為*，因此快速檢測沙門氏菌具有重要意義,。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測沙門氏菌的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板,。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高,。

3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,，引物是根據(jù)人沙門氏菌高度保守的VP1區(qū)設(shè)計,，不會跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng),。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,。

沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×Probe qPCR MagicMix	500 μL（本色蓋）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	沙門氏菌PCR引物	100 μL（白蓋）
試劑四	沙門氏菌qPCR探針	50 μL（棕色管）
試劑五	沙門氏菌陽性對照2.0 (1×10E8拷貝/μL)	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,、-20℃保存，有效期一年,。

自備試劑 DNA 模板,、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）,。

使用方法 一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

二、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個樣品,，好設(shè)置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC,。另外用水作為 NC,。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容,。

三,、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）,。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

成分	樣品管 N+2個	PCR陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix（本色蓋）	10 μL	10 μL	各10 μL
沙門氏菌 qPCR探針（綠蓋）	2 μL	2 μL	各2 μL
沙門氏菌 PCR引物混合液（白蓋）	2 μL	2 μL	各2 μL
待測樣品DNA模板	6 μL	不加	不加
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7號）	不加	不加	各6μL（2號樣到2號管，3號樣到3號管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR反應(yīng) （40個循環(huán)）	94℃	0.5 min
	50℃	0.5 min（采集FAM通道的熒光信號）
	72℃	0.5 min
后延伸	72℃	min

五,、數(shù)據(jù)處理

12.以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度,。
六,、電泳檢測
13.如果有必要電泳確認(rèn)，可取10-20μL PCR產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn)物的大小為400 bp,。但電泳非常容易污染實(shí)驗環(huán)境,，建議不輕易采納,。