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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0634	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

立克次氏體通用PCR試劑盒

Rickettsia spp.

產(chǎn)品及特點

立克次氏體（Rickettsia）為革蘭氏陰性菌,，是一類專性寄生于真核細胞內(nèi) 的 G-原核生物,。是介于細菌與病毒之間,，而接近于細菌的一類原核生物。一般呈球狀或桿狀,是專性細胞內(nèi)寄生物,，主要寄生于節(jié)肢動物,，有的會通過蚤、虱,、蜱,、螨傳入人體、如斑疹傷寒,、戰(zhàn)壕熱。因此對立克次氏體進行快速靈敏的診斷具有重要的意義,。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品,，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板,。

2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化,，專一性強，只擴增立克次氏體,，但跟其他微生物無交叉反應(yīng),。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品,。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,，但只能用于科研,。

立克次氏體通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	立克次氏體通用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	立克次氏體通用 PCR 陽性對照（1 ×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,，不要污染其他試劑,。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為 PC,。另外用水作為 NC,。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取試劑盒兼容,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng),。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
立克次氏體通用 PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對照（水）		18 μL	-
PCR 陽性對照（立克次氏體通用 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液）	-		18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	30 sec
	52℃	30 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效,。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。