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上海信裕生物科技有限公司
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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價: 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  臺 ≥5  臺

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-08-11 16:10:23瀏覽次數(shù):559次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0613 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。
偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α,、β,、γ、未分類皰疹病毒四個亞科,。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織,。

偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

Pseudorabies Virus(PrV)

產(chǎn)品及特點


偽狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,,PrV) 會引起偽狂犬病,病豬的臨床癥狀和病程隨年齡不同而有很大差異:哺乳仔豬為敏感,,15日齡以內(nèi)的仔豬常表現(xiàn)為急性型,,主要表現(xiàn)為體溫升高、拉稀,、發(fā)抖,、運動不協(xié)調(diào)、流涎,、頸部肌肉僵硬,、四肢劃水樣運動,后昏迷死亡,;育肥豬則大多數(shù)伴有體溫升高,,呼吸困難,一般不發(fā)生死亡,,耐過后呈長朗隱性感染帶毒或排毒,;成年豬常不呈現(xiàn)可見臨床癥狀或僅表現(xiàn)為輕微體溫升高,一般不發(fā)生死亡,。母豬妊娠初期,,可在感染后的20天左右發(fā)生流產(chǎn),在妊娠后期,,經(jīng)常發(fā)生死胎和木乃伊,,或者產(chǎn)出弱胎和死胎。在完成豬瘟凈化的地區(qū),,偽狂犬病被認(rèn)為是對經(jīng)濟影響大的豬病毒病,,因此偽狂犬病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用,,為此本公司開發(fā)了簡單快捷的偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR檢測試劑盒,它具有下列特點:

1.即開即用,,用戶只需要提供病毒樣品,。
2.根據(jù)偽狂犬病病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
3.靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4.一管式熒光定量PCR檢測,,避免后續(xù)污染,。
5.本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,,不能用于臨床診斷,。

偽狂犬病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

偽狂犬病病毒PCR 引物混 合液

100 μL(白蓋)

試劑四

偽狂犬病病毒PCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL)

50μL(紅蓋)

試劑五 

DNA病毒裂解液(試用裝)

 

15次9 mL)

試劑六

使用手冊

1 份

運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,,保存期限為 12 個月,。

自備試劑   樣品 DNA。

使用方法 

一,、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于陽性對照濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千 萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病 原,,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽 性對照,。

2. 標(biāo)記 6 個離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同),。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),, 充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。

6. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。

二,、樣品 DNA 的制備

8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),, 一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 的(稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL,,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝,可以將 10μL 原 液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,,充分混勻,,此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此 稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,,充分混勻,,此為 10000 倍稀釋液)再加 上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取 決于所用試劑盒的要求),??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡V苽渌贸蔀闃悠?DNA,。

9. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容。

三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,,在樣品制備室進行)

10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上 步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性 分析,,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于 PCR 陽性對照(用 第 4 號陽性對照稀釋液,濃度為 14810 拷貝/μL),。下面只描述定量分析的步驟,, 定性分析只是把 6 個標(biāo)曲反應(yīng)縮減成 1 個,其余不變,。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):

成分

樣品管

N+2

PCR陰性對照管

PCR陽性

對照管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

(棕色

10 μL

10 μL

各10 μL

偽狂犬病病毒PCR

引物混合液(白

2 μL

2 μL

2 μL

自備10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各2 μL

 N+2待測樣品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得PCR陽性對照

稀釋液(2-7

不加

不加

6μL(2號樣到2號管,,3號樣到3號管

12.蓋上蓋子后上機,,按下面參數(shù)進行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

過程

溫度

時間

預(yù)變性

92℃

5分鐘

PCR反應(yīng)

30個循環(huán))

92℃

60 秒

58

60 秒

72

60 秒

13.數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進行,。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA時,大吸收光譜在471 nm,,結(jié)合DNA時的大吸收光譜在500 nm,,大發(fā)射光譜在530 nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟,。
四,、數(shù)據(jù)處理
14.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,,以Ct值為縱軸,,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,,再推算出其濃度,。
15.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,,則陰性對照Ct必須大于或等于40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,,Ct值應(yīng)該小于或等于30,。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,,如果小于或等于35則為陽性,。如果在35-40之間,則重復(fù)一次,。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,,如果小于40,則為陽性,。

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