幼蟲芽孢桿菌PCR試劑盒

Paenibacillus larvae

產品及特點

美洲幼蟲腐臭病 (American foulbrood ， AFB) 是 由 幼蟲芽孢桿菌 (Paenibacillus larvae)引起的蜜蜂幼蟲和蛹的一種細菌性,、急性,、毀滅性傳 染病，其典型癥狀為封蓋后死亡的幼蟲巢房蓋變潮濕,、下陷,、顏色發(fā)暗并顯 油光，大部分巢房蓋穿孔,，患病幼蟲蟲體變軟,，失去正常白色和光澤，逐漸 變成淡褐色至棕黑色,。AFB 一旦在蜂場發(fā)生,，極易造成幼蟲死亡和蜂群群勢 衰弱，且很難*清除,，給養(yǎng)蜂業(yè)造成重大經濟損失,。世界動物衛(wèi)生組織(OIE) 將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為二類動物疫病和進境動物檢疫疫 病,。本產品是根據 PCR 原理開發(fā)的幼蟲芽孢桿菌檢測試劑盒,，它具有下列特 點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板,。

2. 引物經過精心優(yōu)化,，專一性強，只擴幼蟲芽孢桿菌,，與其他病原沒有交叉 反應,。

3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研,。

幼蟲芽孢桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存，保存期限為一年,。陽性對照需要單獨放置,，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA,。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此 作為 PC。另外用水作為 NC,。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二,、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照,，故需要設置 N+4 個反應,。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產物,。電泳檢測 PCR 產物,。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現,，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效,。對沒有擴增產物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。