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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0534	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

諾如病毒通用RT-PCR試劑盒

Norwalk Viruses(NV)

產(chǎn)品及特點

諾如病毒(Norwalk Viruses,，NV)是一種RNA病毒，是一組形態(tài)相似,、抗原性略有不同的病毒顆粒,。諾如病毒感染性腹瀉在*范圍內(nèi)均有流行，全年均可發(fā)生感染,，感染對象主要是成人和學(xué)齡兒童,，寒冷季節(jié)呈現(xiàn)高發(fā),。美國每年在所有的非細(xì)菌性腹瀉暴發(fā)中，60-90%是由諾如病毒引起,。荷蘭,、英國、日本,、澳大利亞等發(fā)達(dá)國家也都有類似結(jié)果,。在中國5歲以下腹瀉兒童中，諾如病毒檢出率為15%左右,，血清抗體水平調(diào)查表明中國人群中諾如病毒的感染亦十分普遍,。“諾如病毒”感染性腹瀉屬于自限性疾病，沒有疫苗和*藥物,，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義,。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測諾如病毒通用,。它具有下列特點。它具有下列特點：

1. 一站式,，用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分,，包括引物和對照。

2. 根據(jù)諾如病毒通用的保守基因序列設(shè)計的引物,，具有良好的特異性,。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成,，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染,。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR,。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床,。

諾如病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	諾如病毒通用 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	諾如病毒通用 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL,，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份）

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為 12 個月,。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分,，造成假陽性,。

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設(shè)置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照,；用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA,。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二,、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品,，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽性對照	陰性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
諾如病毒通用 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
諾如病毒通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機進(jìn)行 RT-PCR,，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	93℃	5分鐘
PCR反應(yīng) （40個循環(huán)）	95℃	45秒
PCR反應(yīng) （40個循環(huán)）	55℃	120秒
延伸	72℃	5分鐘

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果,。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗,，需要分析實驗失敗的原因,。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、陽性對照有 122bp 預(yù)期的擴增產(chǎn)物的情況下,，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果,，如果有擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性,。